[发明专利]用铜绿假单胞杆菌发酵、分离生产鼠李糖脂的方法

摘要

本发明公开了一种用铜绿假单胞杆菌发酵、分离生产鼠李糖脂的方法，包括以下步骤：一）采用斜面接种法将铜绿假单胞杆菌菌种移入摇瓶进行扩大培养，获得铜绿假单胞杆菌种子液；二）先将发酵培养基加入发酵罐灭菌，然后按照8%～12%的接种量将铜绿假单胞杆菌种子液接入发酵罐内发酵，在接种种子液前，在培养基中加入1-5‰的泡敌；铜绿假单胞杆菌种子液发酵至120小时，获得糊状发酵液；三）使用分离设备对糊状发酵液进行两次萃取蒸馏，获得纯度为80%~90%的膏状鼠李糖脂。本发明能够满足纯度为80%以上的鼠李糖脂低成本大规模工业化生产的需要。

主权项

一种用铜绿假单胞杆菌发酵、分离生产鼠李糖脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：一）采用斜面接种法将铜绿假单胞杆菌菌种移入摇瓶进行扩大培养，获得铜绿假单胞杆菌种子液；二）先将发酵培养基加入发酵罐灭菌，然后按照8%～12%的接种量将铜绿假单胞杆菌种子液接入发酵罐，在接种种子液前，在培养基中加入1‑5‰的泡敌；所述发酵培养基中各组分的浓度为（g/L）：大豆油40~120；KH2PO4 3~7；K2HPO46~10；NaNO3 2~4；NaCl 0.5~2；KCl 0.5~2；MgSO4·7H2O 0.1~1；无水CaCl2 0.01~0.5；微量元素溶液2~10mL/L；微量元素溶液的pH：7.0~8.5，所述微量元素溶液中各溶质的浓度为（g/L）：FeSO4·7H2O 12；ZnSO4·7H2O 3.0；CoSO4·7H2O 1.0；MnSO4·2H2O3.0；铜绿假单胞杆菌种子液在发酵罐内发酵至120小时，获得糊状发酵液；三）使用分离设备对糊状发酵液进行两次萃取蒸馏：1）先将糊状发酵液的pH调节至1~3，然后静置，待自然沉降后，加入乙酸乙酯进行萃取，收集上层萃取液；2）蒸馏步骤1）中获得的上层萃取液，将其中的乙酸乙酯蒸馏去除，获得膏状鼠李糖脂混合物；3）将步骤2）中获得的膏状鼠李糖脂混合物重溶在乙酸乙酯内，对其进行二次萃取，收集位于上层的二次萃取液；4）蒸馏步骤3）中获得的二次萃取液，将其中的乙酸乙酯蒸馏去除，获得纯度为80%~90%的膏状鼠李糖脂。