[发明专利]一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，属于淡水水生生物细胞培养技术领域。鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，是以鱇浪白鱼尾鳍组织细胞为材料，采用组织块法启动原代培养，在含有胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子的pH值为7.0-7.4的DMEM/F12培养基中培养；采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。本发明的有益效果在于：1、在保证鱼体存活的前提下，操作简便易行；2、构建的鱇浪白鱼鳍细胞系（AGF）形态为成纤维样细胞，细胞生长状态良好，能够连续传代，直接用于鱇浪白鱼细胞生物学特性及功能基因的研究，满足了对鱇浪白鱼分子细胞水平理论研究的需要；3、该构建方法也适用于其他鱼类构建鳍条的细胞系。

主权项

一种鱇浪白鱼鳍细胞系的构建方法，其特征在于该构建方法的具体步骤如下：a.制备细胞培养液选择DMEM/F12培养基，向培养基中加入胎牛血清和人碱性成纤维细胞生长因子，使胎牛血清的终浓度为20%，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度为5 ng/ml，pH值为7.0‑7.4，保存于4℃冰箱中，备用；b.原代培养先用8 mg/L高锰酸钾浸泡鲜活鱇浪白鱼10 min，对鱼进行整体消毒，在超净台上取鱇浪白鱼鳍条组织；用HBSS+100 IU/ml青霉素+100 μg /ml链霉素+10 μg /ml两性霉素B的溶液清洗，然后剪成±1 mm3的小块，对鳍条组织块用0.5%透明质酸酶和0.2%II型胶原酶联合消化30 min；经上述处理的组织块均匀接种于25 cm2细胞培养瓶中，加入DMEM/F12+20%FBS+5 ng/ml bFGF+100 IU/ml青霉素+100 μg /ml链霉素+10 μg /ml两性霉素B的细胞培养液5 ml，在28℃培养箱中启动原代培养；取完组织的鱼体放回鱼缸中常规饲养，两个月后鳍条重新长出；c.继代培养待细胞长成单层后，吸出培养瓶中的培养液，用不含抗生素的HBSS溶液清洗两遍，加入0.25%的胰蛋白酶1 ml，消化2 min，细胞变圆后，加入原来吸出的培养液1 ml，用吸管吹打培养瓶底，制成细胞悬液；向细胞悬液内补入DMEM/F12+20%FBS+5 ng/ml bFGF的细胞培养液8 ml，然后接种于两个培养瓶内，在28℃培养箱中培养；待细胞再次长成单层后，仍按c步骤进行传代培养。