[发明专利]食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂筛选平台的建立无效
| 申请号： | 201210260320.1 | 申请日： | 2012-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN102766674A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 夏远峰;张玉珂;秦旭钊;陈景才 | 申请（专利权）人： | 辉源生物科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 杨元焱 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂筛选平台的建立，方法是，首先培养中国仓鼠卵巢细胞的阳性克隆细胞，弃去培养基后加入钙离子检测染料继续培养，弃去钙离子检测染料后加入待测药物孵育，然后再加入激动剂d[Cha4]-AVP，用酶标仪检测，能够抑制激动剂引起的钙离子释放的药物为食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂。本发明以细胞水平的钙流水平为主要检测方法，建立了一套对筛选食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂药物的方法。首次实现了在中国仓鼠卵巢细胞中稳定表达食蟹猴抗利尿激素受体，首次建立并优化了对食蟹猴抗利尿激素受体药物高通量筛选的平台。 | ||
| 搜索关键词： | 食蟹猴抗 利尿 激素 受体 v1a 拮抗剂 筛选 平台 建立 | ||
【主权项】：
一种食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂筛选平台的建立，其特征在于，包括以下步骤：A、在384孔板里每孔植入1.5万个中国仓鼠卵巢细胞的阳性克隆细胞，在37℃、5％二氧化碳氛围的培养箱里培养16‑24小时；B、弃去培养基，200转/分离心10秒去除残留培养基，每孔加入30微升钙离子检测染料，在37℃、5％二氧化碳氛围的培养箱里培养90分钟；C、用钙离子检测缓冲液配制4X的激动剂d[Cha4]‑AVP和1X的待测药物；D、细胞孵育90分钟后，弃去钙离子检测染料，200转/分离心10秒去除残留染料；E、每孔加入30微升1X的待测药物，25℃孵育15分钟，然后每孔再加入10微升4X的激动剂d[Cha4]‑AVP；F、在室温下用酶标仪检测，能够抑制激动剂引起的钙离子释放的药物为食蟹猴抗利尿激素受体V1A拮抗剂。
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