[发明专利]测定烟草中咖啡酸含量的方法

摘要

本发明公开了测定烟草中咖啡酸含量的方法，是采用超高效液相色谱法测定烟草中咖啡酸含量，该方法是：第一步，制备咖啡酸标准品，准确称取咖啡酸标准品，用乙腈定容，制成标准品溶液；第二步，制备供试样品溶液，包括（1）制备鲜烟叶样品，（2）制备烤后烟叶样品，烟叶粉碎过40目筛，（3）提取咖啡酸；最后测定咖啡酸含量：分别取不同浓度的标准品溶液注入超高效液相色谱仪，根据色谱图中峰面积计算出标准曲线，然后计算出咖啡酸含量。本发明的方法具有操作简便、灵敏度高、准确性强、重复性好、测定快速等诸多优点，适用于烟草鲜烟叶和烤后烟叶中咖啡酸含量的测定。

主权项

测定烟叶中p‑香豆酸咖啡酸含量的方法，其特征是采用超高效液相色谱法测定烟叶中咖啡酸含量，包括以下步骤：第一步 制备咖啡酸标准品准确称取咖啡酸标准品10mg，用乙腈定容至10mL，然后吸1 mL用乙腈定容至10mL制成标准品溶液，备用；第二步 制备供试样品溶液（1）制备鲜烟叶样品：液氮取样，然后将鲜烟样放入冷冻干燥仪中冷冻干燥直至恒重即无水分时，再将其研磨成粉，备用；（2）制备烤后烟叶样品：烤后烟叶粉碎过40目筛，备用；（3）提取咖啡酸：取鲜烟叶粉末0.6g或干烤后烟叶粉末0.05g，精密称定，加入30mL的4mol/L的NaOH在摇床上震摇4h，抽滤后加入64mol/L的HCl调节pH至2，然后分别用20mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相并用旋转蒸发仪蒸干，然后用流动相定容后过0.22μm的滤膜后进样； 第三步  测定咖啡酸含量分别取不同浓度的标准品溶液注入超高效液相色谱仪，检测烟叶色谱，根据色谱图中峰面积计算出标准曲线，然后计算出咖啡酸含量；包括：(1) 制备p‑香豆酸标准品准确称取p‑香豆酸标准品10mg，用乙腈定容至10mL，然后吸1 mL用乙腈定容至10mL制成标准品溶液，备用；(2) 制备供试样品溶液（1）鲜烟叶样品制备：液氮取样，然后将鲜烟样放入冷冻干燥仪中冷冻干燥直至恒重（无水分），再将其研磨成粉备用；（2）烤后烟叶样品制备：烤后烟叶粉碎过40目筛备用；（3）取烟叶粉末0.6g，精密称定，加入30mL的3mol/L的NaOH搅拌提取4h，抽滤后加入3mol/L的HCl调节pH至2，然后分别用20mL的1:1的乙醚/乙酸乙酯（v:v）萃取5次，合并有机相并用旋转蒸发仪蒸干，然后用流动相定容后过0.22μm的滤膜后进样； 取事先干燥、粉碎的烟叶粉末0.5g，精密称定，加入30mL的80％的甲醇超声萃取1h，然后离心取上清液浓缩至5mL，过0.22μm有机滤膜后进样;(3)  含量测定分别取不同浓度的标准品溶液注入超高效液相色谱仪，检测烟叶色谱，根据色谱图中峰面积计算出标准曲线，然后计算出p‑香豆酸含量。