[发明专利]一种提高烟草烟叶钾含量的育种方法

摘要

本发明是一种提高烟草烟叶钾含量的育种方法。利用花粉管通道法将高钾植物商陆的总体DNA导入栽培烟草品种红花大金元中，引起其后代烟叶钾含量大幅度提高，为烟草新品种的选育、改良和种质资源的创新提供了丰富的变异来源。

主权项

一种提高烟草烟叶钾含量的育种方法，其特征在于，利用花粉管通道法将高钾植物商陆的总体DNA导入烟草品种红花大金元中进行栽培，具体包括以下步骤：（1）供体DNA的提取：取0.2g幼嫩烟草冰冻叶片入砚钵中→加入2×CTAB提取液700μl研磨后转入1.5ml离心管→于65℃保温20‑30min→冷却后加入等体积的氯仿：异戊醇混匀10min→10000r/min离心10min→取上清液至一新管→加入100μl 5M NaCl和1ml冰冷乙醇沉淀DNA→挑出DNA沉淀，用70%乙醇洗净干燥→溶解于100μlTE中；所述的2×CTAB提取液配方为：2%CTAB，1.4M NaCl，100mM Tris‑HCl，100mM EDTA，pH8.0，2%β‑巯基乙醇；所述的氯仿∶异戊醇的体积比为24∶1；（2）导入方法：选择生长健壮、主茎中上部已开放的花朵，将其花冠褪下，露出柱头，然后用左手拇指甲做砧板托住柱头，右手拿刀片沿与柱头成45℃角切除1/4～1/3柱头，最后将DNA提取液滴于柱头上，再将花冠戴上；导入时间从早晨6:00花初放开始，然后每一小时导入一次，至下午4:00花凋萎止。