[发明专利]一种生产葡萄糖淀粉酶的方法

摘要

本发明公开了一种生产葡萄糖淀粉酶的方法。属生物技术领域。首先克隆曲霉、毛壳菌和酵母的葡萄糖淀粉酶基因；构建含以上三种葡萄糖淀粉酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体，并将其载体分别转化相对应的宿主菌；分别筛选高表达以上所述的三种葡萄糖淀粉酶的重组子作为工程菌；发酵毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产重组混合葡萄糖淀粉酶。与传统的由单基因编码的葡萄糖淀粉酶不同，本发明生产的重组混合葡萄糖淀粉酶的适合反应的温度和pH范围广，适合于多种用途；由于实现三个酶基因同时在工程菌中表达，使葡萄糖淀粉酶的产量得到显著提高，起到降低生产成本作用。

主权项

一种生产葡萄糖淀粉酶的方法，其特征在于，其具体步骤如下：1)、应用分子生物学技术分别克隆曲霉的葡萄糖淀粉酶基因、毛壳菌的葡萄糖淀粉酶基因和酵母的葡萄糖淀粉酶基因；2)、分别构建含曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架、毛壳菌的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和酵母的葡萄糖淀粉酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体；3)、将上述构建的毕赤酵母表达载体转化毕赤酵母从而获得毕赤酵母重组子，将上述构建的酿酒酵母表达载体转化酿酒酵母从而获得酿酒酵母重组子，将上述构建的枯草芽孢杆菌表达载体转化枯草芽孢杆菌从而获得枯草芽孢杆菌重组子；4)、筛选高表达以上所述的三种葡萄糖淀粉酶的毕赤酵母重组子作为含曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架、毛壳菌的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和酵母的葡萄糖淀粉酶基因表达框架的毕赤酵母工程菌，筛选高表达以上所述的三种葡萄糖淀粉酶的酿酒酵母重组子作为含曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架、毛壳菌的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和酵母的葡萄糖淀粉酶基因表达框架的酿酒酵母工程菌，筛选高表达以上所述的三种葡萄糖淀粉酶的枯草芽孢杆菌重组子作为含曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架、毛壳菌的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和酵母的葡萄糖淀粉酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌工程菌；5)、分别发酵以上所述的毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产重组葡萄糖淀粉酶。