[发明专利]用于检测人类EGFR基因突变的引物、探针、试剂盒及检测方法

摘要

本发明提供一种用于检测EGFR基因突变的引物、探针、试剂盒及检测方法。本发明的方法包括：（1）提供引物和探针；（2）检测样本的处理和DNA提取；（3）荧光定量PCR反应体系的成分；（4）待检测的EGFR突变基因的靶序列；（5）利用ARMS引物区分野生型和突变型基因，反应结果通过FAM和JOE的荧光强度来判断。本发明所提供的引物、探针及检测方法可同时检测EGFR基因上的29种突变，灵敏度高，特异性强，检测速度快，整个检测过程只需要60分钟。

主权项

用于检测人类EGFR基因突变的引物及探针，包括下列5组引物和探针中的至少一组：（1）5’‑ ggtgacccttgtctctgtgttcttgtcc‑3’  SEQ ID NO: 15’‑ gtgccgaacgcaccggatg ‑3’      SEQ ID NO: 25’‑ gtgccgaacgcaccggagtt ‑3’      SEQ ID NO: 35’‑ gccgaacgcaccggagga ‑3’       SEQ ID NO: 45’‑ FAM/ccttcaagatcctcaagagagcttggttggg/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 5（2）5’‑ gggcagcatgtggcaccatct‑3’      SEQ ID NO: 65’‑ ccttgttggctttcggagatgtcttg ‑3’    SEQ ID NO: 75’‑ tccttgttggctttcggttccttg ‑3’      SEQ ID NO: 85’‑ tccttgttggctttcggagatattttg ‑3’    SEQ ID NO: 95’‑ ccttgttggctttcggagccttg ‑3’      SEQ ID NO: 105’‑ ccttgttggctttcggagattgct ‑3’      SEQ ID NO: 115’‑ tggctttcggagatgttggttcct ‑3’      SEQ ID NO: 125’‑ ccttgttggctttcggagattcctt ‑3’     SEQ ID NO: 135’‑ gttggctttcggagatggttccttg ‑3’     SEQ ID NO: 145’‑ FAM/tctcaccttctgggatccagagtccctatga/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 15（3）5’‑ cccgtatctcccttccctgattacctt ‑3’     SEQ ID NO: 165’‑ gcacacaccagttgagcaggtact ‑3’     SEQ ID NO: 175’‑ cctccaccgtgcagctcatcct ‑3’        SEQ ID NO: 185’‑ caggaagcctacgtgatggccct ‑3’      SEQ ID NO: 195’‑ cagcgtggccagcgtggac ‑3’         SEQ ID NO: 205’‑ tgatggccagcgtggacggt ‑3’         SEQ ID NO: 215’‑ agcgtggacaacccccaccac ‑3’       SEQ ID NO: 225’‑ FAM/cccttcggctgcctcctggactatgt/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 23（4）5’‑ cacagcagggtcttctctgtttca ‑3’       SEQ ID NO: 245’‑ gcacccagcagtttggcac ‑3’          SEQ ID NO: 255’‑ tggtattctttctcttccgcacccaggt ‑3’     SEQ ID NO: 265’‑ FAM/ tcttgacatgctgcggtgttttcaccagtac/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 27（5）5’‑ cttccagtttgccaaggcacgag ‑3’       SEQ ID NO: 285’‑ cctctgcacataggtaatttccaaattcc ‑3’    SEQ ID NO: 295’‑ JOE/ccacctcacagttattgaacatcctctggagg/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 305’‑ FAM/ccacctcacagttattgaacatcctctggagg/BHQ1‑3’ SEQ ID NO: 31。