[发明专利]用于提取试管树苗的基因组DNA的试样制备方法有效
申请号: | 201210236236.6 | 申请日: | 2012-07-10 |
公开(公告)号: | CN103540584A | 公开(公告)日: | 2014-01-29 |
发明(设计)人: | 孙清荣;孙洪雁;辛力;周广芳 | 申请(专利权)人: | 山东省果树研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 泰安市泰昌专利事务所 37207 | 代理人: | 姚德昌 |
地址: | 271000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 一种用于提取试管树苗的基因组DNA的试样制备方法,其步骤是:把研磨至粉末状的试管树苗进行预前处理,预前处理步骤为:a、把增殖生长30天左右的试管树苗顶部嫩梢,研磨至粉末加入离心管中,按照试管树苗与提取液体积与β-巯基乙醇的比例1g:3-10ml:25-80ul,依次加入提取液和β-巯基乙醇,摇动混合均匀;在温度为3-6℃的环境中,在离心力为8000-12000g的离心机中把离心管运行8-12分钟;b、抛弃上清部分,沉淀再次加入提取液,上下颠倒离心管使沉淀充分溶解,在温度为3-6℃的环境中,在离心力为8000-12000g的离心机中把离心管运行8-12分钟;C、至少重复步骤b两次,在离心管中得到的沉淀物即为经过预前处理的前期试样;使用高盐CTAB提取液按照CTAB方法,把试管树苗中的蛋白质和多糖进行充分处理,使DNA释放出来,因此制取的基因组DNA效果好。 | ||
搜索关键词: | 用于 提取 试管 树苗 基因组 dna 试样 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种用于提取试管树苗的基因组DNA的试样制备方法;其特征是:其步骤是:(1)、把研磨至粉末状的试管树苗进行预前处理,预前处理步骤为:a、把增殖生长30‑40天的试管树苗顶部嫩梢,研磨至粉末加入离心管中,按照试管树苗与提取液体积与β-巯基乙醇的比例1 g : 3‑10 ml : 25‑80 ul,依次加入提取液和β-巯基乙醇,摇动混合均匀;在温度为3‑6℃的环境中,在离心力为8000‑12000 g的离心机中把离心管运行8‑12分钟;b、抛弃上清部分,沉淀再次加入提取液,上下颠倒离心管使沉淀充分溶解,在温度为3‑6℃的环境中,在离心力为8000‑12000 g的离心机中把离心管运行8‑12分钟;C、至少重复步骤b两次,在离心管中得到的沉淀物即为经过预前处理的前期试样,(2)、使用高盐CTAB提取液按照CTAB方法,得到试管树苗进行提取基因组DNA的后期试样。
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