[发明专利]抑制大脑eIF6基因表达的核酸抑制分子、其筛选方法和用途

摘要

本发明基于eIF6对记忆力的负调控和增强谷氨酸受体表达的作用，提供了一种在体外培养细胞中筛选有效抑制大脑eIF6基因表达的核酸抑制分子的方法，通过该方法筛选的核酸抑制分子，以及所述核酸抑制分子预防和/或治疗运动性疲劳和/或记忆力减退及其相关疾病的用途。

主权项

一种筛选有效抑制大脑eIF6基因表达的eIF6核酸抑制分子的方法，该方法包括以下步骤：1)将以eIF6基因序列为靶序列的长度为20～40个，优选21～27个核苷酸的候选eIF6核酸抑制分子包装到带有报告基因的病毒表达载体中，形成病毒干扰载体；2)将步骤1)中获得的病毒干扰载体与体外培养的成纤维细胞共孵育使得所述病毒干扰载体感染成纤维细胞；3)观察被感染的成纤维细胞中的报告基因表达产物表达，将所述报告基因表达产物表达达到80％以上的细胞用于下一步筛选；4)提取步骤3)中筛选的报告基因表达产物表达达到80％以上的成纤维细胞的RNA并反转录为cDNA，以SEQ ID NO：11、12、13、14作为引物以反转录的cDNA作为模板进行实时定量PCR检测eIF6mRNA的表达；5)将与阴性对照病毒载体感染的成纤维细胞相比eIF6 mRNA表达相比减少50％以上的候选eIF6核酸抑制分子作为初始筛选分子；6)将包装有步骤5)中确定的初始筛选分子的病毒干扰载体感染小鼠48小时，采用Western Blot检测小鼠大脑中突触后神经元的谷氨酸受体蛋白NMDAR的表达量，若NMDAR的表达量与野生型小鼠相比升高30％以上，则所述初始筛选分子被确定为有效抑制eIF6基因表达的eIF6核酸抑制分子。