[发明专利]一种靶向CD123阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒构建方法及其用途无效
| 申请号： | 201210204636.9 | 申请日： | 2012-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN102747046A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 李恭楚;李新;陈磊;张艳红;骆菁菁;武虎;李晓艳;刘新垣 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/63;C12N15/66;A61K38/17;A61K48/00;A61P35/02 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种靶向CD123阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒构建方法及其用途。构建sCAR-IL3的表达框；插入到pXC2-sp-E1A,获得pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A；pXC2插入外源抗癌基因表达框构建得到pXC2-△E1B-gene；将pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A上的sCAR-IL3-sp片段置换到pXC2-△E1B-gene上，构建得到pXC2-sCAR-IL3-sp-E1A-△E1B-gene；分别和pBHGE3骨架质粒共转染HEK293细胞，完成溶瘤腺病毒的组装。对表达CD123的白血病细胞具有较好的靶向性，抗癌基因随着病毒复制其拷贝数大幅度升高，从而实现对肿瘤细胞的高效杀伤能力。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 cd123 阳性 白血病 细胞 溶瘤腺 病毒 构建 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
一种靶向CD123阳性白血病细胞的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，所述方法构建的溶瘤腺病毒携带sCAR‑IL3表达框或携带sCAR‑IL3表达框和外源抗癌基因表达框，具体的构建方法包括如下步骤：1）构建sCAR‑IL3的表达框；2）酶切回收sCAR‑IL3的表达框，插入到pXC2‑sp‑E1A质粒相应酶切位点, 获得pXC2‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A质粒；3） pXC2质粒在删除E1B后在原位置引入酶切位点，插入外源抗癌基因表达框构建得到pXC2‑△E1B‑gene质粒；通过酶切连接将pXC2‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A质粒上的sCAR‑IL3‑sp片段置换到pXC2‑△E1B‑gene质粒上，构建得到pXC2‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A‑△E1B‑gene质粒；4）pXC2‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A质粒及pXC2‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A‑△E1B‑gene质粒分别和pBHGE3骨架质粒共转染HEK293细胞，在HEK293细胞内完成溶瘤腺病毒Ad‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A和溶瘤腺病毒Ad‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A‑△E1B‑gene的组装；5）分离纯化溶瘤腺病毒Ad‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A和/或溶瘤腺病毒Ad‑sCAR‑IL3‑sp‑E1A‑△E1B‑gene。
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