[发明专利]一种生产重组混合L-阿拉伯糖异构酶的方法有效
| 申请号： | 201210141968.7 | 申请日： | 2012-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN102719463A | 公开（公告）日： | 2012-10-10 |
| 发明（设计）人： | 张爱联;尹慧祥;陈丽萍;崔艳艳;张添元 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/61 | 分类号： | C12N15/61;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/90;C12P19/24;C12R1/84 |
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| 地址： | 571101 海南省海口市学院*** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种生产重组混合L-阿拉伯糖异构酶的方法。属生物技术领域。首先分别克隆嗜热脂肪芽孢杆菌、新阿波罗栖热袍菌和大肠杆菌的L-阿拉伯糖异构酶基因；构建含这三种L-阿拉伯糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体，并将其载体转化毕赤酵母获得工程菌；发酵毕赤酵母工程菌生产重组混合L-阿拉伯糖异构酶。这种重组混合酶不仅酶活性明显高于用毕赤酵母表达其中的单种酶，而且在pH6.0和80℃(符合异构D-半乳糖为D-塔格糖的生产条件要求)具有高的异构D-半乳糖为D-塔格糖的酶活性。本发明有利于解决因尚无符合最适pH5.0-6.0并且最适温度＞60℃的L-阿拉伯糖异构酶生产菌株而制约酶法生产D-塔格糖产业发展的问题，促进酶法生产D-塔格糖产业发展。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 生产 重组 混合 阿拉伯糖 异构酶 方法 | ||
【主权项】：
一种生产重组混合L‑阿拉伯糖异构酶的方法。其特征在于：应用分子生物学技术克隆新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因，构建含新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母表达载体；将上述构建的毕赤酵母表达载体转化毕赤酵母从而获得毕赤酵母重组子；筛选高表达重组混合新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶的毕赤酵母重组子作为含新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母工程菌；用含新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母工程菌生产重组混合新阿波罗栖热袍菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶、嗜热脂肪芽孢杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶和大肠杆菌的L‑阿拉伯糖异构酶基因编码的L‑阿拉伯糖异构酶。
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