[发明专利]一种利用SLP将功能蛋白定向固定的方法

摘要

本发明公开了一种利用SLP将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，该方法是通过基因工程的手段将SLP进行改造，保留其自组装的特性，使其作为融合表达标签与各种功能蛋白进行融合表达，形成SLP融合蛋白，再将SLP融合蛋白固定到介质表面，从而实现了功能蛋白的定向固定化。本发明的方法能将功能蛋白在介质表面作高度有序、高密度地固定化，对介质表面无需特殊处理，工艺简单，对功能蛋白无损伤，有利于保护蛋白活性，提高功能蛋白活性利用率。

主权项

一种将功能蛋白定向固定到介质表面的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)扩增SLP和功能蛋白的编码基因，然后将两种蛋白的编码基因连接入原核表达载体中，得到含有两种蛋白基因的原核表达载体；再将该原核表达载体转化入大肠杆菌表达菌株，加入IPTG诱导大肠杆菌表达菌株表达融合蛋白，然后将菌体破碎并离心，得到SLP与功能蛋白融合的融合蛋白的包涵体沉淀物；(2)用尿素溶解SLP融合蛋白的包涵体沉淀物，然后用凝胶层析方法纯化，得到可溶性的SLP融合蛋白；(3)将SLP融合蛋白与含有1～100mM CaCl2、pH值6～10的Tris溶液混合，得到包埋液，该包埋液中SLP融合蛋白终浓度为0.01～1mg/mL，；(4)在4～50℃条件下，将介质表面埋于包埋液中孵育2～24小时；(5)去除包埋液，用HEPES溶液清洗介质表面；(6)在室温下，将介质表面埋于DMP溶液孵育10～120min；(7)去除DMP溶液，用Tris缓冲液清洗介质表面；步骤(1)所述SLP蛋白的氨基酸序列见SEQ ID NO.1；步骤(1)所述的功能蛋白为蛋白A、链酶亲和素、蛋白G、蛋白A/G或蛋白L中的一种；所述的蛋白A的氨基酸序列见SEQ ID NO.2，链酶亲和素的氨基酸序列见SEQ ID NO.3，蛋白G的氨基酸序列见SEQ ID NO.4，蛋白A/G的氨基酸序列见SEQ ID NO.5，蛋白L的氨基酸序列见SEQ ID NO.6。