[发明专利]基于高通量测序技术进行核酸定性定量检测的方法有效
| 申请号： | 201210103138.5 | 申请日： | 2012-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN102628082A | 公开（公告）日： | 2012-08-08 |
| 发明（设计）人： | 杨楠;艾洪新;臧伯玮;何越 | 申请（专利权）人： | 凯晶生物科技(苏州)有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 范晴 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于高通量测序技术进行核酸定性定量检测的方法，包括采用多基因多区域两步单向扩增捕获特异核酸靶标方法进行制备单链DNA文库后，采用高通量测序技术对获得的单链DNA文库进行测序，然后对测序结果进行核酸的定性分析和定量分析，获得核酸定性定量检测结果。该方法比普通的real-timeQ-PCR定量方法成本低很多，应用更加广泛提高了核酸定量的样本通量，可以对核酸的系列进行精确的定性和定量。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 通量 技术 进行 核酸 定性 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于高通量测序技术进行核酸定性定量检测的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：（1）将待捕获的目的基因组随机打断后采用第一引物进行第一次PCR扩增；所述第一引物一端与标记有生物素的第一接头DNA片段相连，并与待捕获的目的基因区域序列互补结合的寡核苷酸单链序列； （2）使用捕获组分对进行第一次单向PCR扩增后的目的基因区域序列进行捕获；所述捕获组分包括亲和素和与亲和素结合的固相载体；所述亲和素与所述第一次单向PCR扩增后的目的基因区域序列上的生物素相结合；（3）使用第二引物对亲和素结合后的目的基因区域序列进行第二次单向PCR扩增；所述第二引物一端与第二接头DNA片段相连，并与所述目的基因区域序列互补结合，且与第一引物进行PCR扩增的方向相反；（4）将第二次单向PCR扩增后的目的基因区域序列除去亲和素生物素复合物， 获得两端带有相同或不同DNA接头的单链DNA文库；（5）采用高通量测序技术对获得的单链DNA文库进行测序，然后对测序结果进行核酸的定性分析和定量分析，获得核酸定性定量检测结果。
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