[发明专利]一种高效结合DNA的二氧化硅纳米颗粒的制备方法及其应用于神经干细胞转染方法

摘要

本发明提供一种高效结合DNA的二氧化硅纳米颗粒的制备方法以及应用于神经干细胞转染方法，利用正硅酸乙酯在由环己烷、正丁醇、Triton X-100、水组成的微乳体系中水解，并加入适量氨水调节反应速率，利用N-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷的偶联作用，一次性制备表面偶联氨基基团的二氧化硅纳米颗粒。本发明所述方法制备出的颗粒粒径约65nm、大小均匀、稳定，表面带正电荷、能高效结合DNA。纳米颗粒与DNA高效结合后，可以直接加入到神经干细胞培养体系中，介导外源基因的转染，或联合电穿孔法转染神经干细胞。

主权项

一种高效结合DNA的二氧化硅纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在烧杯中分别加入环己烷40mL，Triton X‑10010mL，正己醇10mL，室温下磁力搅拌器搅拌30min，；2)加入1mL双蒸水，继续搅拌30min；3)等比例混合AEAPS(N‑(β‑氨乙基)‑γ‑氨丙基三乙氧基硅烷)和TEOS(正硅酸乙酯)，加入AEAPS与TEOS混合液至2)；4)加入氨水0.5mL，继续搅拌1小时；再加入氨水0.5mL，搅拌24小时；5)加入30mL丙酮，搅拌摇匀30min，分装至2个50mL超速离心管；13000rpm离心20离心，22℃；6)弃上清，各管加30mL丙酮，振匀，37℃，100％功率快速超声分散；13000rpm离心20min，22℃；7)弃上清，各管加75％酒精30mL，振匀，370C，100％功率快速超声分散；13000rpm离心20min，22℃；8)弃上清，各管加双蒸水30mL，振匀，37℃，100％功率快速超声分散；13000rpm离心20min，22℃；9)弃上清，各管加双蒸水15mL，振匀，37℃，100％功率快速超声分散；10)冷冻真空干燥待用。