[发明专利]一种K562细胞扩增激活NK细胞的方法

摘要

本发明属于免疫学领域，具体是指使用跨膜IL-21，CD14，CD19，CD86和CD137转染的K562细胞和低浓度白介素2共同作用定向扩增激活自然杀伤细胞(NK)的方法。本发明是以K562细胞系转录稳定表达CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的表达载体，CD8α为在细胞膜上表达的膜蛋白，CD8α基因连接白介素21基因后使得白介素21表达在细胞膜上，成为跨膜蛋白；然后培养K562细胞一段时间，最后经物理、化学方式得到纯化的K562细胞，再对NK细胞进行培养。本发明扩增激活的NK细胞可以提高病人的免疫力，抵抗病毒和细菌；而且效率高。本发明在医学上具有广泛用途。

主权项

一种K562细胞扩增激活NK细胞的方法，其特征在于包括下述步骤：(1)以K562细胞系转录稳定表达CD8α‑白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的表达载体，CD8α为在细胞膜上表达的膜蛋白，CD8α基因连接白介素21基因后使得白介素21表达在细胞膜上，成为跨膜蛋白；而CD14、CD19、CD86和CD137为膜蛋白，载体中含有病毒启动子和选择标记基因；(2)当外源表达载体进入宿主细胞后，激活启动子，培养K562细胞一段时间，即可以得到在细胞膜上的白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137多肽；(3)经培养后的K562细胞膜上具有表达跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的细胞，通过强酸，强碱、和/或辐照、及通过高速离心收集K562细胞；或对K562细胞的依次用硫酸铵或乙醇沉淀，强酸提取，阴离子或阳离子交换色谱，疏水作用层析，亲和层析，羟基磷灰石色谱法，色谱法和凝集素进行纯化收集；(4)将上述离心收集的K562细胞与NK细胞、或NK细胞和外周血单核细胞的组合、或是NK细胞与淋巴细胞的组合、或是外周血单核细胞和其它淋巴细胞的组合、或是白介素2和/或白介素21和/或CD14和/或CD19和/或CD86和/或CD137与白细胞的组合进行共同培养、或在纯化分离K562细胞后与PBMC共同培养，激活扩增NK细胞，直至NK细胞代表总数的50％以上。