[发明专利]一种荧光同步检测肝炎及艾滋病毒核酸的方法及试剂盒

摘要

本发明属于核酸诊断技术领域，具体为一种同步提取并荧光互补探针杂交同步检测肝炎和艾滋病毒的方法及试剂盒。该方法包括以磁珠作为自动化介质，通过生物素及寡聚核苷酸修饰的捕获探针特异性同步捕获HBV、HCV、HIV-1核酸的方法和实时同步多项检测的基于Taqman探针的荧光互补探针杂交法。相应的试剂盒包括去抑制剂、裂解液、磁珠悬液、洗涤液、洗脱液、内对照、2×Annealing Buffer、荧光探针、阳性对照、阴性对照。本发明的特点是：无需PCR反应、单管操作、封闭性检测、自动化程度高、多种病毒核酸同步提取，同步实时检测；灵敏度高、特异性好、精密度高；适用于大规模血液筛查、临床检验及科研单位使用。

主权项

一种检测艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎核酸的试剂盒，为一种同步提取并荧光互补探针杂交同步检测肝炎和艾滋病毒的方法及试剂盒，其特征在于包含去抑制剂、裂解液、磁珠悬液、洗涤液、洗脱液、内对照、2×Annealing Buffer、荧光探针、阳性对照、阴性对照，其中，所述的去抑制剂为含蛋白酶的醇溶液；所述裂解液为裂解血清、血浆样本中病毒颗粒的异硫氰酸胍溶液，并含有由生物素修饰的寡核苷酸作为核酸提取的捕获探针；所述洗涤液为含氯化钠的溶液；所述洗脱液为低盐缓冲液；所述磁珠悬液含链亲和素包裹磁珠；所述2×Annealing Buffer为退火缓冲液；所述荧光探针为HBV、HCV、HIV‑1和内标特异性的各自两条互补的Taqman探针；所述阳性对照为含有与HBV、HCV、HIV‑1荧光探针序列对应互补的一段DNA或RNA；所述阴性对照为正常献血员的血浆；所述内对照为不同于HBV、HCV、HIV‑1荧光探针序列的一段内标RNA，可于内标探针特异性结合；其中：HBV的互补Taqman探针为：5′‑FAM‑CGA CGA GGC AGG ACC CCT AGA AGA A‑NFQ‑3′，5′‑HEX‑TTC TTC TAG GGG TCC TGC CTC GTC G‑NFQ‑3′；HCV的互补Taqman探针为：5′‑FAM‑CTG CGG AAC CGG TGA GTA CAC‑NFQ‑3′，5′‑HEX‑GTG TAC TCA CCG GTT CCG CAG‑NFQ‑3′；HIV‑1的互补Taqman探针为：5′‑FAM‑CCA TCA ATG AGG AAG CTG CAG AAT GGG ATA‑NFQ‑3′，5′‑HEX‑TAT CCC ATT CTG CAG CTT CCT CAT TGA TGG‑NFQ‑3′；内标的互补Taqman探针为：5′‑FAM‑AAT GTA ACA GAA AAC TTT AAC ATG TGG AAA‑NFQ‑3′，5′‑ROX‑TTT CCA CAT GTT AAA GTT TTC TGT TAC ATT‑NFQ‑3′，且，每一对互补的荧光标记探针，均为FAM探针量稍多于非FAM探针量； 并将4对探针等浓度等体积混合，制成探针混合液，每条探针浓度约为5μM。