[发明专利]致泻大肠杆菌四重荧光定量PCR检测试剂盒

摘要

本发明提供一种致泻大肠杆菌四重荧光定量PCR检测试剂盒，由荧光定量PCR反应液、O157标准品、H7标准品、O104标准品、H4标准品、对照品组成，其中荧光定量PCR反应液包含PCR反应缓冲液（含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物、耐热TaqDNA聚合酶等）、特异性上下游引物和探针。本发明通过一个PCR反应，可以从标本中检测出致泻大肠杆菌O157：H7、和O104：H4型细菌的存在，比传统的普通PCR和单重荧光定量PCR方法更简便、快速和准确，而且对检测的细菌进行实时准确定量，为临床上疑似该菌感染的患者早期明确诊断，以便及时制定治疗方案，减少死亡率。

主权项

一种致泻大肠杆菌四重荧光定量PCR检测试剂盒，由荧光定量PCR反应液、O157标准品、H7标准品、O104标准品、H4标准品、对照品组成，其中荧光定量PCR反应液包含PCR反应缓冲液、特异性上下游引物和特异性探针，其中PCR反应缓冲液含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物、耐热Taq DNA聚合酶，特异性上下游引物、特异性探针和标准品的序列分别如下： O157上游引物‑F: 5’‑ TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT ‑3’O157下游引物‑R: 5’‑ AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT ‑3’O157特异性探针‑P: 5’‑ FAM‑ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT‑BHQ1‑3’H7上游引物‑F: 5’‑GGCGCAGGCTGCTGATT ‑3’H7下游引物‑R: 5’‑AGCTTCAAAACGTGATGCGTTAGCTG ‑3’H7特异性探针‑P: 5’‑ HEX‑CAGATTTACCCACATCAGCATG ‑BHQ1‑3’O104上游引物‑F: 5’‑ AGGAGTAAACAATGTCAAAGCAAC ‑3’   O104下游引物‑R: 5’‑ AAAATCCTTTAAACTATACGCCC‑3’     O104特异性探针‑P : 5’‑ ROX‑ACTTGGTTTTTTTGTATTAGCAATAAGTGGTG‑BHQ2‑3’H4上游引物‑F: 5’‑ GCTGGGGGTAAACAAGTCAA ‑3’   H4下游引物‑R: 5’‑ CAGAATCAACGACCGCATATT ‑3’     H4特异性探针‑P : 5’‑ CY5‑TGTCTTACACTGACACCGCGTCTAACA‑BHQ3 ‑3’O157基因标准品：TGGCATGACG TTATAGGCTA CAATTATAGG ATGACAAATA TCTGCGCTGC TATAGGATTA  GCCCAGTTAG  AACAAGCTH7基因标准品：GGCGCAGGCT GCTGATTCAG CTTCAAAACG TGATGCGTTA GCTGCCACCC TTCATGCTGA  TGTGGGTAAA  TCTGTTO104基因标准品：TGTCGCGCAA  AGAATTTCAA CTTTACTTGG  TTTTTTTGTA  TTAGCAATAA  GTGGTGTCAT  TTCAAGTCAG  GTTTCTAGGG  CGTATAGTTT AAAGGATTTTH4基因标准品：GCTGGGGGTA AACAAGTCAA TTTACTGTCT TACACTGACA CCGCGTCTAA CAGTACTAAA  TATGCGGTCG  TTGATTCTG。