[发明专利]一种基于microRNA结构的肝细胞选择性多靶点干扰质粒载体的构建方法及其功能验证有效
| 申请号： | 201110363118.7 | 申请日： | 2011-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN102433352A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 田志刚;耿建林;孙汭;魏海明 | 申请（专利权）人： | 中国科学技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京市汉信律师事务所 11373 | 代理人： | 王文生 |
| 地址： | 230026*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于microRNA结构的能实现肝细胞选择性多靶点干扰的质粒载体pLIVE-(shLuc155mir-shLuc155mir-shEGFP131mir-shEGFP425mir)的构建方法及其功能验证。所述质粒载体由具有肝细胞选择性的甲胎蛋白增强子/白蛋白启动子(AFP enhancer/albumin promoter)、多克隆位点区(Multiple Cloning Sites，MCS)、两个内含子区(intron)、多个靶基因的基于microRNA结构的短发卡RNA转录单位(microRNA30-based shRNA，shRNAmir)和质粒序列组成。在第二个内含子(intron 2)区域内，通过同尾酶结构的设计，串联多个相同或者不同的针对荧光素酶基因(Luciferase)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的shRNAmir转录单位，同时选择性的高效抑制肝细胞内Luciferase和EGFP的表达。该载体及其构建方法可以应用于肝细胞基因的功能研究和肝脏疾病基因治疗药物的研发，同时对于其他细胞/组织特异性干扰载体的构建具有重要的借鉴和参考价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 microrna 结构 肝细胞 选择性 多靶点 干扰 质粒 载体 构建 方法 及其 | ||
【主权项】：
一种基于microRNA结构的肝细胞选择性多靶点干扰质粒载体的构建方法，所述质粒载体由具有肝细胞选择性的甲胎蛋白增强子/白蛋白启动子、多克隆位点区、两个内含子区、多个靶基因的基于microRNA结构的短发卡RNA转录单位和质粒序列组成，所述载体的建立方法是在质粒的内含子区域内，通过同尾酶结构的设计，串联多个相同或者不同的针对靶基因的shRNAmir转录单位，因而可以同时选择性的高效抑制肝细胞内靶基因的表达。
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