[发明专利]一种重组可溶性hSHH-N蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 201110349188.7 | 申请日： | 2011-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN102443600A | 公开（公告）日： | 2012-05-09 |
| 发明（设计）人： | 孙艳;王丁丁;胡耀华;金嘉怡;苏晓朴 | 申请（专利权）人： | 广东药学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/52;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510006 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组可溶性hSHH-N蛋白的制备方法。该方法是以SEQIDNO:1~2为引物扩增出hSHH-N基因，再连接到载体pET43.1a(+)构建重组表达载体，转化大肠杆菌，IPTG诱导其产生重组可溶性hSHH-N融合蛋白，融合蛋白经肠激酶酶切，除去Nus-tag蛋白标签后，再经过镍柱纯化、超滤、透析，最后冻干得到所需重组可溶性hSHH-N蛋白。本发明的制备方法步骤简单，成本低，制备的可溶性hSHH-N蛋白具有诱导骨形成活性，具有较好的市场前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 可溶性 hshh 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种重组可溶性hSHH‑N蛋白的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）以SEQ ID NO:1~2为引物，GenBank登录号NM_000193.2的序列为模板，进行PCR扩增反应，PCR条件是94℃，5min，94℃，30s，57℃，1min，72℃，30s，35个循环，72℃，10min；（2）PCR产物与载体pET43.1a(+)用限制性内切酶EcoR I，Xho I进行双酶切，连接构建重组质粒，转化大肠杆菌，在LB培养基上37℃条件下培养，构建重组hSHH‑N基因工程菌；（3）培养重组hSHH‑N基因工程菌，IPTG诱导其产生重组可溶性hSHH‑N融合蛋白；（4）步骤（3）重组hSHH‑N基因工程菌进行破碎细胞、分离、收集融合蛋白；（5）融合蛋白经透析除去咪唑，加入肠激酶，25℃酶切过夜，再经过镍柱纯化，得到初步纯化的重组可溶性hSHH‑N蛋白；（6）初步纯化的重组可溶性hSHH‑N蛋白经过超滤、透析、冻干得到所述重组可溶性hSHH‑N蛋白。
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