[发明专利]多参照内标法定量基因表达量的方法无效
| 申请号： | 201110316621.7 | 申请日： | 2011-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN102352414A | 公开（公告）日： | 2012-02-15 |
| 发明（设计）人： | 吴沿友;黄华坤;李海涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院地球化学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 吴无惧 |
| 地址： | 550002*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种多参照内标法定量基因表达量的方法，包括以下步骤：（1）形成目标基因扩增产物和看家基因扩增产物；（2）将目标基因扩增产物和看家基因扩增产物以及多个参照内标扩增产物同时电泳，获得凝胶图像；（3）将凝胶图像经图像处理，获得表征图像；（4）将表征图像上的多个参照内标扩增产物的DNA图谱的像素点与总RNA的倍数拟合成方程： |
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| 搜索关键词： | 参照 法定 基因 表达 方法 | ||
【主权项】：
1.一种多参照内标法定量基因表达量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）将总RNA设置成一系列的倍数，并分别为模板，逆转录成为相应的互补DNA，再以这些互补DNA为模板，以看家基因设计出的引物为引物，以常规的统一反应体系进行PCR扩增，形成多个参照内标扩增产物；同时，将以稀释到一定倍数的RNA为模板，逆转录成为相应的互补DNA，再以此互补DNA为模板，分别以被考察的基因设计出的引物和看家基因设计出的引物为引物，以上述常规的统一反应体系进行PCR扩增，形成目标基因扩增产物和看家基因扩增产物；（2）将目标基因扩增产物和看家基因扩增产物以及多个参照内标扩增产物同时电泳，获得凝胶图像；（3）将凝胶图像处理成灰度图像，经过亮度和对比度的调整，获得表征图像；（4）将表征图像上的多个参照内标扩增产物的DNA图谱的像素点与总RNA的倍数拟合成方程：![]()
，这里的X为一个参照内标扩增产物的DNA图谱区的像素点值，Y为对应的看家基因的倍数，a, b分别为方程的常数；（5）将表征图像上的目标基因扩增产物和看家基因扩增产物的DNA图谱的像素点分别带入方程![]()
，分别计算出目标基因扩增份额Y目标和看家基因扩增份额Y看家；（6）目标基因扩增份额Y目标和看家基因扩增份额Y看家的比值，即为目的基因的相对表达量GE目标。
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