[发明专利]一种水稻根特异性表达基因EXP18D启动子的克隆方法

摘要

本发明属于植物基因工程领域，提供一种水稻根特异性表达基因EXP18D启动子的克隆方法。该方法先获取拟南芥根特异性基因EXP18，再获取水稻根特异性表达基因EXP18D启动子。因为本发明克隆到水稻根特异性表达基因EXP18D启动子，而该启动子为植物根系特异性表达的启动子，可以驱动相关功能基因的表达，所以该启动子具有特定地改变植物的根部形态、获得相应的抗旱植株潜力。

主权项

一种水稻根特异性表达基因EXP18D启动子的克隆方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：Ⅰ、获取拟南芥根特异性基因EXP18：A、分别从拟南芥植株中提取拟南芥根总RNA和拟南芥叶总RNA，再分别进行反转录PCR反应，分别扩增得到拟南芥根cNDA序列和拟南芥叶cNDA序列；B、分别以所述的拟南芥根cNDA序列和拟南芥叶cNDA序列为模板，分别根据拟南芥根特异性基因设计引物，再分别进行半定量PCR反应，筛选得到拟南芥根特异性基因EXP18；Ⅱ、获取水稻根特异性表达基因EXP18D启动子：A、将所述的拟南芥根特异性基因EXP18的序列进行在线分析比对，得到水稻根特异性基因；B、分别从水稻植株中提取水稻根总RNA和水稻叶总RNA，再分别进行反转录PCR反应，分别扩增得到水稻根cNDA序列和水稻叶cNDA序列；C、分别以所述的水稻根cNDA序列和水稻叶cNDA序列为模板，分别以所述的水稻根特异性基因设计引物，进行半定量PCR反应，筛选得到水稻根特异性表达基因EXP18D；D、在线分析得到水稻根特异性表达基因EXP18D的启动子，再在水稻根DNA中进行克隆得到所述的水稻根特异性表达基因EXP18D启动子。