[发明专利]一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法

摘要

本发明公开了通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法。通过选取齿肋赤藓纯群，选取生长健壮的植株，经冲洗、消毒后，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖、茎以及茎叶碎片接种在已灭菌的BBM固体培养基中，然后用封口膜将培养皿封口置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度36μmol·m-2·s-1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2-3周后，苔藓茎尖、芽孢及叶片基部均会诱导出现新的分枝；茎叶碎片会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝；2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系。

主权项

一种通过无性繁殖建立齿肋赤藓单株克隆体系的方法，其特征在于，所述的具体培养步骤包括：(1)在野外藓类结皮中，选取生长良好的齿肋赤藓纯群，在实验室内经形态鉴定确认是齿肋赤藓后，再选取一株生长健壮的植株，通过无菌蒸馏水冲洗干净、70％酒精消毒处理20s；(2)配制经改良的BBM液体培养基，将pH调至8.0，添加琼脂粉，添加量为15g·L 1，混匀后121℃灭菌30min，然后将培养基倒入培养皿中；(3)在接种过程中，通过超净工作台，用已灭菌的尖头镊子取已处理好的单株齿肋赤藓再生能力强的茎尖和茎，接种在已灭菌的BBM固体培养基中，另外将茎叶碎片接在其它固体平板中，用parafilm封口膜将培养皿封口；(4)将上述获得的培养皿置于光照培养箱中，培养温度25℃，光照强度36μmol·m 2·s 1，光照/黑暗时间为14h/10h，培养2 3周后，苔藓茎尖和茎上的芽孢再生能力强，经光照诱导后开始长出新的分枝；在叶片基部形成愈伤组织后也会出现新的分枝；茎叶碎片会出现原丝体，原丝体发育到一定阶段，出现新的分枝；2周后，将新的分枝取下，分别取其茎尖和茎再次转接到新的固体培养基中，反复转接，逐级扩大培养，形成单株克隆系。