[发明专利]一种改进的免疫共沉淀技术方法

摘要

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种优化的免疫共沉淀技术。本发明在原有的免疫共沉淀技术上，将免疫共沉淀技术与蛋白交联技术结合起来。即利用蛋白交联剂交联抗原抗体复合物，经特异缓冲液洗脱，免疫印迹检测显著降低了实验中抗体重链和轻链的污染，增加了方法的特异性。本发明提高了免疫共沉淀方法的特异性，具有稳定性和可重复性的特点，提高了实验效率，为深入的进行分子生物学，分子肿瘤学、细胞生物学、生物化学等学科的研究提供了有益的帮助。

主权项

一种改进的免疫共沉淀方法，其包括如下步骤：(1)准备材料：(a)提供含有蛋白X‑Y结合的双体复合物的待测样品；(b)提供抗蛋白X的抗体；(c)提供固定在微珠上的蛋白G，其中所述固定是共价连接的固定；(2)将上述(b)的抗体和(c)的蛋白G接触，在合适的条件下使固定在微珠上的蛋白G与抗X抗体的Fc片段物理性结合，得到微珠‑蛋白G‑抗X抗体的三体复合体，(3)将上述(2)得到的三体复合体进行适当的共价交联处理，提供微珠‑蛋白G‑抗X抗体的三体复合体交联物，(4)将上述(3)得到的三体复合体交联物与(a)中的双体复合物在合适的条件下接触，形成微珠‑蛋白G‑抗X抗体‑X‑Y五体复合物；通过离心得到该五体复合物，(5)将上述(4)得到五体复合物进行加热变性处理，通过离心，得到含有微珠‑蛋白G‑抗X抗体的三体复合体交联物的沉淀、含有蛋白X和Y蛋白的上清，(6)将上清进行SDS电泳，进行常规免疫共沉淀的免疫分析。