[发明专利]一种重组蛋白A基因及其表达产物的制备方法和用途

摘要

本发明提供了一种重组蛋白A基因，具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，及由该基因编码的重组蛋白A。本发明还提供了表达该重组蛋白A基因的重组表达载体PET32a-P，和被它所转化的大肠杆菌BL21/DE3，以及制备重组蛋白A的方法。本发明提供的重组蛋白A用于抗体检测、分离、纯化，并能与层析介质载体组成亲和层析介质。本发明生产的重组蛋白A具有蛋白结合特异性强，亲和力高，纯化效率大大改善的优点，与市售的ProteinA Sepharose 4Fast Flow相比，其动态吸附载量明显提高。

主权项

一种重组蛋白A亲和层析介质的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)通过化学合成的方法设计合成重组蛋白A基因单体，5‘端Ala‑Asp突变成Val‑Asp，以形成AccI酶切位点，各重组蛋白A基因单体间以AccI酶切位点相连，第一个重组蛋白A基因单体前端加入与表达载体相连的NcoI酶切位点，6个His和EK酶切位点，最后一个重组蛋白A基因单体末端加入中止密码子TAA和与表达载体pET32a相连的BamH I酶切位点；(2)将步骤(1)的重组蛋白A基因单体酶切后接入载体pET32a的相应酶切位点之间，再以Acc I内切酶酶切，连接成包含3个串连重组蛋白A基因单体的重组蛋白A基因表达载体pET32a‑P；(3)将步骤(2)的表达载体pET32a‑P转化大肠杆菌BL21/DE3，筛选、酶切，获得重组转化子BL21/pET32a；(4)将步骤(3)的菌株BL21/pET32a进行培养发酵，使其高效表达重组蛋白A，再收集菌体，经分离、纯化得到重组蛋白A产品；(5)用环氧氯丙烷、氢氧化钠与琼脂糖或葡聚糖凝胶在水介质中进行反应，反应产物与步骤(4)获得的重组蛋白A在5‑25℃温度下反应15‑20小时，反应完后清洗再抽干，获得重组蛋白A凝胶。