[发明专利]一种检测常见耳聋突变基因的方法

摘要

本发明涉及一种检测常见耳聋突变基因的方法，具体地是检测GJB2、SLC??26A4、线粒体基因突变的方法。通过设计相应的引物用多重PCR扩增三个耳聋基因的三个片段，分别用限制性内切酶Apal、ECO521和Alw26l酶切步骤(2)中的三个片段，酶切产物再次PAGE胶检测。利用PCR-RFLP技术检测耳聋患者的热点突变是一种快速、简便、高效、经济的耳聋致病基因筛查的方法。

主权项

检测GJB2、SLC 26A4、线粒体基因A1555G和C 1494T突变的方法包括如下步骤：(1)根据GJB2、SLC 26A4、线粒体基因A1555G和C 1494T突变位点的DNA序列，设计相应的引物；(2)采样后提取样品中的用多重PCR扩增三个耳聋基因的三个片段；(3)PAGE胶或琼脂糖胶检测，当目的片段产量和特异性都很好时，可行酶切；分别用限制性内切酶Apal、ECO521和Alw261酶切步骤(2)中的三个片段；(4)酶切产物再次PAGE胶检测；其中多重PCR扩增的步骤和条件是：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至95℃左右5分钟后，使模板DNA双链解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至61℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板 引物结合物在70℃条件下在DNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性 退火 延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”。