[发明专利]一步法提取单细胞蛋白中的核糖核酸和细胞壁多糖的方法

摘要

本发明公开了一种核糖核酸(RNA)和细胞壁多糖的提取方法，具体是用啤酒酵母制备的单细胞蛋白，包括如下步骤：添加单细胞蛋白干重10～30％的水后充分混合，慢速冷冻，并置于超声波辅助水浴中，反复解冻破壁；再加入重量比为5～18％氯化钠，迅速冷却，离心分离得上清液和细胞壁多糖沉淀物；沉淀物由水洗涤干燥后得细胞壁多糖干品。上述上清液于等电点PI4.2沉淀蛋白质后，再于等电点PI2.5沉淀RNA，并经乙醇洗涤后干燥得到RNA干品。由于采用反复冻融破壁单细胞蛋白、用调节等电点的方法分离氨基酸的混合物，具有分离提取率高、纯度高、方法简便的特点。

主权项

一种一步法提取单细胞蛋白中的核糖核酸和细胞壁多糖的方法，有如下步骤：1)冻融破壁：用啤酒酵母制备的单细胞蛋白，添加其干重10～30％的水，充分混合后冷冻至-3～0℃；再置于超声波功率100W～600W、频率为30～58KHz的50～100℃超声波辅助水浴中解冻10～80min；反复上述冻融破壁过程1～5次；得破壁后溶液；2)细胞壁多糖提取：再将上述溶液升温至75～100℃，加入占溶液重量比为5～18％的氯化钠，保温60～140min后冷却至0～4℃，离心分离得到上清液和细胞壁多糖沉淀物；沉淀物由水洗涤干燥后得细胞壁多糖干品；3)核糖核酸提取：取步骤2)上清液控制等电点，于等电点PI4.2沉淀得蛋白质；离心分离的蛋白质废弃，得到的上清液继续控制等电点，于等电点PI2.5静置2-10h后RNA盐就析出，乙醇洗涤杂质，干燥后获得RNA干品。