[发明专利]一种基于PCR技术鉴定单拷贝转基因烟草的方法

摘要

本发明提供了一种在烟草转基因过程中快速鉴定单拷贝转基因植株的方法，其利用烟草核基因组上已知的单拷贝内源基因为内标，提取转基因烟草植株总DNA为模板，同时PCR扩增内源和外源目的基因；反应产物在琼脂糖凝胶上电泳检测，呈现出大小相近的两条特异性扩增条带；经ImageJ软件捕捉分析两条目的条带的亮度比，对于T2代烟草转基因植株，当外源基因与内源基因的目的条带灰度比为1时，所检测植株就为含有单拷贝外源基因的转基因烟草纯合体植株。上述方法仅需要提取转基因烟草基因组DNA样品和一步聚合酶链式反应，就可以在短时间内检测大量样品，寻找到携带单拷贝外源基因的转基因烟草植株，简单高效，成本低廉，适宜做单拷贝转基因烟草的大规模筛选。

主权项

一种基于PCR技术鉴定单拷贝转基因植株的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)转基因烟草植株基因组DNA的提取(2)外源基因和内源基因PCR引物的设计，所述内源基因选择在NCBI公布的烟草核基因组上且已被证明为单拷贝的内源基因；(3)证明外源基因和内源基因两对特异性引物具有相同的扩增效率；(4)寻找最佳循环数；(5)检测出携带单拷贝外源基因的转基因烟草植株：以烟草核基因组上已知单拷贝内源基因RNR2为内标，以提取的转基因烟草植株基因组DNA为模板，在相同退火温度下，置于单一PCR管中同时进行聚合酶链式反应；反应产物琼脂糖电泳，染色后，在凝胶成像系统下外源基因和内源基因两条目的片段呈现出大小不同的条带，照相保存；将图片置于ImageJ软件下，捕捉分析两条目的条带的灰度比；当内源基因与外源基因的目的条带灰度比为1时，所检测的T2代转基因植株即为含有单拷贝外源基因的植株。