[发明专利]多西环素残留的ELISA检测方法及试剂盒与应用

摘要

本发明属于免疫分析技术领域。具体涉及一种用于多西环素(DOX)残留检测的酶联免疫方法及试剂盒。本发明的方法主要包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品前处理和ELISA检测方法的建立。本发明的试剂盒主要由抗DOX特异性抗体，DOX标准品、包被有DOX-OVA偶联物的酶标板组成。本发明的试剂盒和方法具有简便、快速、灵敏、准确等优点，适合用于动物可食性组织中DOX残留的检测。

主权项

1、一种多西环素药物残留的ELISA检测方法，包括制备免疫原、包被原、抗体、酶标板和样品前处理，其步骤如下：(1)将半抗原多西环素用对氨基苯甲酸作连接臂，再与牛血清白蛋白偶联得到免疫原；(2)将半抗原多西环素采用赫夫曼消除反应后，再与鸡卵黄血清白蛋白偶联得到包被原；(3)将步骤(1)合成的多西环素免疫原免疫得到特异性兔多克隆抗体；(4)将步骤(2)合成的多西环素包被原包被所述的酶标板；(5)制备包被液，浓缩洗涤液，样品稀释液，辣根过氧化酶标记羊抗兔抗体，底物液，底物A储存液，底物B储存液和终止液；(5)将待检可食性动物组织进行处理，用0.01M pH7.4磷酸缓冲液稀释处理得到待测样品；(6)对步骤(5)待测样品进行ELISA测定；其中步骤(5)所述的试剂组分及其配比如下：包被液为0.05mol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液：1.59g Na2CO3，2.93g NaHCO3，加蒸馏水定容至1000mL；浓缩洗涤液为0.05％吐温-20的0.01M pH7.4磷酸缓冲液：8.0g NaCl，0.2g KCl，2.9gNa2HPO4·12H2O，0.2g KH2PO4，0.5mL吐温-20，加蒸馏水至100mL；封闭液：卵黄血清白蛋白1g，将该卵黄血清白蛋白溶于100mL pH7.4磷酸缓冲液中；底物缓冲液：4.91g柠檬酸.H2O，19.38g Na2HPO4.12H2O，加三蒸水至1000mL；底物A储存液：100mg四甲基联苯胺，50mL无水乙醇；底物B储存液：75mg过氧化氢脲，10mL三蒸水；底物显色液：在体积为10mL的底物显色液中含有9.5mL底物缓冲液，32μL底物B储存液，0.5mL底物A储存液；终止液：2mol/L H2SO4溶液。