[发明专利]一种检测鱼类精子线粒体损伤的方法

摘要

一种检测鱼类精子线粒体损伤的方法，涉及水产养殖技术，需要提供一种检测鱼类精子线粒体损伤的方法，本发明采集一定数量的鱼类精子，其特征是精液标本用PBS洗涤后300×g离心5min；PBS悬浮沉淀精子，调精子密度为1×106/ml，加入Rhl23，37℃水浴孵育10min，离心弃上清，PBS重复洗涤离心，PBS悬浮，加入PI，染色5min，通过采用荧光双染法对线粒体正常和受到损伤的精子进行染色，经过前处理后直接用流式细胞分析仪进行检测，可定量区分线粒体膜功能良好的精子、线粒体膜功能丧失的精子和坏死精子。

主权项

一种检测鱼类精子线粒体损伤的方法，采集一定数量的鱼类精子，其特征是将精液标本用0.01mol/L、PH 7.4的PBS洗涤2次后300×g离心5min；PBS悬浮沉淀精子，调精子密度为1×106/ml，加入Rhl23，37℃水浴孵育10min，离心弃上清，PBS重复洗涤离心2次，PBS悬浮，加入PI，终浓度10ug/ml，染色5min，利用FACSCalibur型流式细胞仪检测，仪器状态设置：前向散射FSC与侧向散射SSC为线性放大，荧光通道FL1和FL2对数放大，测每个精子的荧光强度，每份悬液检测10000个精子，数据用Cell Quest软件进行分析；右下象限Rhl23+/PI-为线粒体膜功能良好的精子，左下象限Rhl23+/PI-为线粒体膜功能丧失的精子，左上象限Rhl23-/PI+为坏死精子。