[发明专利]一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法无效
| 申请号： | 200910031901.6 | 申请日： | 2009-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN101619325A | 公开（公告）日： | 2010-01-06 |
| 发明（设计）人： | 何韶衡;魏继福 | 申请（专利权）人： | 江苏省人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12P21/02 |
| 代理公司： | 南京苏科专利代理有限责任公司 | 代理人： | 何朝旭 |
| 地址： | 210029*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法，尤其是一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Pera5的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过杆状病毒-昆虫表达系统生产美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白，从而避免在不同的表达系统中(例如细菌和酵母菌)对Per a 5过敏原结构造成影响的问题，并提供一种亲和层析的方法，解决天然Per a 5过敏原纯化工艺复杂的问题。使用杆状病毒-昆虫表达系统得到的Per a 5蛋白的活性是使用大肠杆菌得到的Per a 5蛋白活性的1.6倍。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 杆状病毒 昆虫 表达 系统 生产 美洲 过敏原 蛋白 per 方法 | ||
【主权项】：
1.一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 5的方法，其步骤包括：(1)从美洲大蠊组织中提取总RNA；(2)将总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板，用引物ATGACCATCGACTTCTACTAC和TCACTTCTTGGCGAGGTTATC进行PCR反应，获得美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白的编码基因；(3)将Per a 5蛋白的编码基因克隆到杆状病毒载体中，转染昆虫细胞诱导表达Per a 5蛋白；(4)采用亲和层析方法对Per a 5蛋白进行纯化，从而得到美洲大蠊过敏原Per a 5蛋白。
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