[发明专利]转基因创造切花满天星抗美洲斑潜蝇品种的方法

摘要

本发明提供一种转基因创造切花满天星抗美洲斑潜蝇品种的方法，经过对满天星高效遗传转化再生体系的构建、满天星抗生素本底筛选、利用Bt基因对满天星品种G33进行基因转化、转化植株的抗生素筛选、转化植株的Pcr鉴定、转化苗的生根扩繁，获得了抗美洲斑潜蝇虫害的转基因满天星组培苗。有效提高满天星抗美洲斑潜蝇虫害的能力，与同期接种对照株系相比，美洲斑潜蝇发病程度明显降低，表明转基因株系能有效抵抗由美洲斑潜蝇引起的满天星虫害，降低了满天星栽培管理中的成本，对实际种植生产有实际意义。

主权项

1、一种转基因创造切花满天星抗美洲斑潜蝇品种的方法，其特征在于包括下列步骤：A，满天星高效转化再生体系的建立：选择离体培养条件下生长健康的满天星单株，在无菌条件下取小叶片作为材料，在分化培养基即：Ms+BA 0.5-2.0mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L上培养14-21天，其中，培养温度为24～25℃，光照强度为2000～2500LX；B，Bt基因对满天星的转化：将根癌农杆菌pBI-Bt/LBA4404单菌落，置于含50mg/L的Km和5mg/L的Rif的LB培养基中震荡培养过夜，取出菌液，置于LB液体培育基中，震荡培养4-5个小时，之后对A步骤的满天星叶片进行侵染，侵染时间为6～10min，转入Ms培养基中，黑暗下培养2天，得满天星侵染叶片；C，转基因植株的筛选：将B步骤的满天星侵染叶片转到MS基本培养基上培养2～3天后，再转到含有羧苄青霉素Cb的分化培养基即：Ms+BA 0.5-2.0mg/L+NAA 0.05-0.2mg/L+Cb 400-500mg/L上培养12～16天后，选择分化正常的满天星转化苗，转入含有Km的分化培养基即：Ms+BA 0.5-2.0mg/L+NAA 0.05-0.2mg/L+Km 50mg/L中再次进行筛选培养2～3周，经筛选后生长正常的满天星株系在分化培养基：Ms+BA0.5-2.0mg/L+NAA 0.05-0.2mg/L上进行组织培养扩繁后，得转基因植株；D、生根、炼苗及移栽：将C步骤所得转基因植株经分化培养基：Ms+BA 0.5-2.0mg/L+NAA 0.05-0.2mg/L扩繁后，转移到生根培养基：Ms+NAA 0.2-0.4mg/L+IAA 0.1-0.3mg/ml上，在24～26℃，光照强度2000～2500Lx条件下培养14-21天，待组培苗植株底部长出愈伤组织块后，移栽到珍珠岩中，遮荫网下一次过渡25-35天，根系健壮、小苗叶绿健壮时，移栽到红土:腐叶土＝3:1的土壤中二次过渡25-40天，之后移栽到大棚中进行定植栽培，得抗美洲斑潜蝇虫害的满天星切花种苗。