[发明专利]转基因植物中新霉素磷酸转移酶基因的传感器检测方法有效
| 申请号： | 200810093985.1 | 申请日： | 2008-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN101260440A | 公开（公告）日： | 2008-09-10 |
| 发明（设计）人： | 高宏伟;孙伟;孙敏;刘彩霞;焦奎 | 申请（专利权）人： | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N27/327 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人： | 张中南 |
| 地址： | 266002*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种转基因植物中新霉素磷酸转移酶基因的传感器检测方法，其特征是该方法包括以下步骤：环介导等温扩增得到扩增反应物－新霉素磷酸转移酶基因的双链目标序列、将该双链目标序列在水浴中热解成单链目标序列后在金电极表面自组装固定，即得到新霉素磷酸转移酶基因的目标序列修饰电极、然后将纳米硫化铅对来源于新霉素磷酸转移酶基因的探针序列进行标记得到标记探针序列，将该标记探针序列与目标序列修饰电极上的目标序列进行分子杂交，并进行同位镀汞阳极溶出法的电化学测定，检测出相应的铅离子，其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且使用方便。 | ||
| 搜索关键词： | 转基因 植物 新霉素 磷酸转移酶 基因 传感器 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种转基因植物中新霉素磷酸转移酶基因的传感器检测方法，其特征在于该方法有以下步骤：环介导等温扩增反应得到扩增反应物-新霉素磷酸转移酶基因的双链目标序列、以及将该双链目标序列在水浴中热解成单链目标序列后在金电极表面自组装固定，即得到新霉素磷酸转移酶基因的单链目标序列修饰电极、然后将纳米硫化铅对来源于新霉素磷酸转移酶基因的探针序列进行标记得到标记探针序列，将该标记探针序列与目标序列修饰电极上的目标序列进行分子杂交并进行阳极溶出法的电化学测定，所得电化学信号即为电化学检测转基因植物中新霉素磷酸转移酶基因的依据，且其中环介导等温扩增反应中有：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、300-500μmol/L dNTP、2-4mmol/L硫酸镁、0.8-1.2μmol上游内引物、0.8-1.2μmol/L下游内引物、0.2-0.3μmol/L上游外引物、0.2-0.3μmol/L下游外引物和1-1.5mol/L甜菜碱，1U/μL UNG酶；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中，上游内引物：5-CTGATAGCGGTCCGCCACACGGAAAATGGCCGCTTTTCTG-3、下游内引物：5-ACATAGCGTTGGCTACCCGTGAGCGATACCGTAAAGCACGAG-3、上游外引物：5-TGCTTGCCGAATATCATGGT-3、下游外引物：5-CGATAGAAGGCGATGCGC-3；(2)Bst DNA聚合酶：8U/μL。
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