[发明专利]一种降解药渣中残留泰乐菌素的方法

摘要

本发明涉及一种降解药渣中残留泰乐菌素的方法，尤其是涉及一种利用微生物降解药渣中残留泰乐菌素的方法，主要包括：土壤菌悬液的制备、菌种选育培养基的配制、菌种驯化培养基的配制、菌种筛选培养基的配制、菌种活化复壮培养基的配制、药渣发酵培养基的配制、降解菌株的筛选等步骤；本发明提供一种通过筛选，培育出能够降解药渣中残留泰乐菌素的复合菌，然后再从复合菌中分离、纯化得到降解泰乐菌素的菌株，配制相应的药渣培养基，接入降解菌发酵降解药渣中残留的泰乐菌素。

主权项

1.一种降解药渣中残留泰乐菌素的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)土壤菌悬液的制备：用四分取样法，称取堆放泰乐菌素药渣附近土样1～10g，置于三角瓶中，加入100～200ml磷酸盐缓冲溶液，摇匀后，置于恒温摇床中，25～35℃下，200r/min振荡20～40min；2)菌种选育培养基的配制：将下述重量的原料混合而成即可得菌种选育培养基：泰乐菌素药渣200g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，K2HPO4 0.1g，FeSO4·7H2O 0.2g，水800ml；3)菌种驯化培养基的配制：将下述原料按重量比混合而成即可得菌种驯化培养基：①一级驯化培养基：泰乐菌素药渣与水按1∶9的比例配制；②二级驯化培养基：泰乐菌素药渣与水按2∶8的比例配制；③三级驯化培养基：泰乐菌素药渣与水按3∶7的比例配制；④四级驯化培养基：泰乐菌素药渣与水按4∶6的比例配制；4)菌种筛选培养基的配制：将下述重量的原料混合而成即可得菌种筛选培养基：①初筛分离培养基：泰乐菌素药渣200g，琼脂20g，水800ml；②复筛分离培养基：酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，酒石酸泰乐菌素标准品0.04g，水1000ml；③分离纯化培养基：蛋白胨10g，葡萄糖5g，泰乐菌素药渣浸出液1000ml；5)菌种活化复壮培养基的配制：将下述重量的原料混合而成即可得菌种活化复壮培养基：酵母浸出粉10g，蛋白胨10g，泰乐菌素药渣浸出液1000ml；6)药渣发酵培养基的配制：将下述重量的原料混合而成即可得药渣发酵培养基：泰乐菌素药渣700～900g，麸皮300～100g，K2HPO4 0.1～0.2g，FeSO4·7H2O 0.1～0.2g，水800～900ml；7)取上述步骤1)制备的土壤菌悬液10～20ml，加入到100～200g上述步骤2)制备的菌种选育培养基中，搅拌均匀，置25～35℃恒温摇床中，120r/min下培养60～72h；取培养后的菌悬液，按2～5％的接种量接入到上述步骤3)制备的一级菌种驯化培养基中，置25～35℃恒温摇床中，120r/min培养60～72h，重复该步骤5～10次，所用菌种驯化培养基由一级逐级升至四级；8)取驯化后的培养液1～3ml，用磷酸盐缓冲溶液梯度稀释为10-1、10-2......10-10浓度，然后采用倾注平板法将稀释后菌液接种于初筛分离培养基，混合后倾注倒板，依据菌落形态及其生长周期的不同，依次编号并将其接入液体复筛培养基，经培养传代后再采用涂布平板法接种到固体复筛培养基，经再次分离后将其接入液体分离纯化培养基，培养传代后划线接种到固体分离纯化培养基，并重复该步骤3～4次后，完成菌种的分离纯化，即可筛选出降解泰乐菌素的菌株；9)取上述步骤8)降解泰乐菌素的菌株，接入到上述步骤5)制备的菌种活化复壮培养基中，置25～35℃恒温摇床中，120r/min下培养20～30h，4000r/min离心15min后，悬浮于新的菌种活化复壮培养基中，25～35℃恒温摇床中120r/min继续培养8～14h，即可得到泰乐菌素降解菌悬液；10)取上述步骤6)制备的药渣发酵培养基100～200g，接入上述步骤9)制备的泰乐菌素降解菌悬液2～10ml，搅拌均匀，25～35℃发酵60～120h，然后在60～100℃下烘干，粉碎后即可。