[发明专利]一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法

摘要

本发明公开了一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法，通过细胞生物学的方法，以检测无细胞基质中保留的黏附因子、生长因子和趋化因子。将无细胞基质匀浆处理，吸取上清液包被培养板，进行种子细胞的黏附实验，以检测无细胞基质中保留的黏附因子；制备无细胞基质的条件培养基，观察种子细胞在此条件培养基中的生长速率，增殖、迁移活性和刮伤愈合的潜能，来检测无细胞基质中保留的生长因子和趋化因子。本发明着眼于无细胞基质中保留的生物活性因子的细胞生物学效应，检测技术简单，方便，成本较低，可进一步推广应用。

主权项

1.一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法，其特征在于所述的生物活性因子包括黏附因子、生长因子和趋化因子，该检测方法的步骤如下：a)种子细胞的分离和培养；b)将无菌的无细胞基质浸入缓冲液中，匀浆，离心，吸取无细胞基质匀浆上清液，保存备用；c)用上述的无细胞基质匀浆上清液包被培养板，进行种子细胞的细胞黏附实验，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的黏附因子；d)分别配制种子细胞的基础培养基和全培养基，将其各等分为两份，其中一份浸入无菌的无细胞基质，振荡孵育后得到条件基础培养基和条件全培养基，另一份不浸入无菌的无细胞基质，也同时进行振荡孵育，得到对照基础培养基和对照全培养基；e)用上述的条件全培养基和对照全培养基进行种子细胞的培养，绘制细胞生长曲线，比较种子细胞的生长速率，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的生长因子；f)用步骤d中的条件基础培养基和对照基础培养基进行种子细胞的增殖实验，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的生长因子；g)用步骤d中的条件基础培养基和对照基础培养基进行种子细胞的迁移实验，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的趋化因子；h)用步骤d中的条件基础培养基和对照基础培养基进行种子细胞的刮伤愈合实验，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的趋化因子；i)根据步骤c，e，f，g和h的检测结果以确定无细胞基质中保留的生物活性因子中含有黏附因子、生长因子和趋化因子，或者含有这三种因子中的一种或两种。