[发明专利]脑脊液诱导自体骨髓干细胞分化为神经干细胞的方法

摘要

本发明涉及一种由自体骨髓、自体血清、自体脑脊液培养骨髓间质细胞诱导分化为神经干细胞、神经元细胞的方法。属骨髓干细胞分化为神经干细胞的方法。采用常规用低糖DMEM/F₁₂培养基，自体血清替代原来的胎牛血清，自体脑脊液替代原来的添加剂及刺激因子，取少量的自体骨髓培养出较多的、能满足临床需要的细胞数量。具有成本低廉、取材容易，避免人畜共患疾病，异性蛋白排斥反应等优点。采用脑脊液诱导骨髓间质细胞成为神经干细胞的方法有效解决了传统方法的缺陷。

主权项

1. 一种脑脊液诱导自体骨髓干细胞分化为神经干细胞的方法，其特征是由自体骨髓、自体血清、自体脑脊液培养骨髓间质细胞诱导分化为神经干细胞、神经元细胞，具体步骤如下：1)常规用低糖DMEM/F12培养基+10％自体血清加常规量的双抗；2)取骨髓15ml，用淋巴细胞分离应分离细胞层，用磷酸盐缓冲液PRS洗三遍；3)取1×107细胞悬液接种于25ml被多聚赖氨酸包被过的细胞瓶中；4)三天换半量，五天后换全量培养基；5)二周后扩增传代共5次，骨髓干细胞抗体CD34、CD45用流式细胞仪测定100％阳性；6)取骨髓干细胞2×107细胞悬液2ml通过做腰穿将细胞悬液注入蛛网膜下腔，在注入前抽2～3ml脑脊液，离心取上清液即脑脊液，分装备用；7)将传第5代的骨髓干细胞用脑脊液覆盖三天，CD90、CD45神经干细胞抗体用流式细胞仪测定100％阳性；8)加2-3ml DMEM/F12无血清培养基，每天加10μl/L脑积液，3天左右分化为神经元细胞。