[发明专利]一种从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中回收蛋白的方法

摘要

一种从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中回收蛋白的方法，属于生物分离工程领域，涉及到蛋白分离、纯化技术。本发明的技术特征是将含蛋白的凝胶化溶液与不符合制剂要求的微胶囊分离开来，对含蛋白的凝胶液进行浓缩、脱盐；而不符合制剂要求的微胶囊中加入破囊液后，分别在静置或超声的条件下，通过盐析沉淀的方法，从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中分离出蛋白，并采用凝胶层析的方法进一步纯化和浓缩目的蛋白。本发明的效果和益处是采用重复性好、不破坏蛋白类药物的生物活性、易于操作和工业放大的方法直接从载蛋白类药物海藻酸钙微胶囊中分离、回收蛋白，提高了蛋白类药物的利用率，大大降低了蛋白类药物传递系统的生产成本。

主权项

1.一种从制备海藻酸盐微胶囊的废弃物中回收蛋白的方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行：1)将制备的含海藻酸盐微胶囊的凝胶液，按照药物制剂的实际要求，采用筛分法、离心沉降法和旋风分离法中的一种或者一种以上任意组合，分离出液相、符合制剂要求的微胶囊以及未达到制剂要求的微胶囊；2)对步骤1)所得液体，采用超滤、透析和凝胶层析方法中的一种或者一种以上任意组合对其进行浓缩和脱盐处理；3)对步骤1)所得的未达到制剂要求的海藻酸盐微胶囊，按照微胶囊∶破囊液重量比为1∶20～1∶50的比例，加入浓度为0.05～0.2mol/L的破囊液后，静置8～24h，其中破囊液为柠檬酸盐、磷酸盐、EGTA和乳酸盐中的一种；4)对步骤3)所得液体先在1000～10000rpm下离心5～20min，所得上清液在静置或超声的条件下进行盐析沉淀后，再在1000～10000rpm下离心5～20min，其中盐析所使用的盐类为30％～100％饱和度的硫酸铵、硫酸钠(钾)、氯化钠(钾)、硫酸镁中的一种；5)离心分离得步骤4)中的沉淀，用生理盐水、0.05～0.2mol/L的Tris-HCl和0.05～0.2mol/L的PBS中的一种或者一种以上任意组合的缓冲液溶解后，再经过0.45～0.22μm的微孔滤膜过滤；6)将步骤5)所得的液体上凝胶层析柱，流动相选用与步骤6)中溶解沉淀时相同的缓冲液，以0.1～1mL/min的流速，检测并收集蛋白的吸收峰，凝胶层析的介质可视回收蛋白的性质不同，选用相应颗粒大小的葡聚糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺中的一种；7)将步骤6)收集到的液体，采用超滤、透析和凝胶层析方法中的一种或者一种以上任意组合进行浓缩和脱盐处理。