[发明专利]寡核苷酸及其衍生物的脱保护和纯化

摘要

本发明涉及用于核酸分子的合成、脱保护和/或纯化的方法，所述核酸分子例如包含一个或多个核糖核苷酸的寡核苷酸。这种核酸分子包括siRNA、dsRNA、核酶、反义和衔接头。

主权项

1.一种方法，其包括步骤：a)合成包含一个或多个核糖核苷酸的核酸分子，使用选自下组的方法：基于固相亚磷酰胺、溶液相亚磷酰胺、固相H-膦酸酯、溶液相H-膦酸酯、混合相亚磷酰胺和混合相H-膦酸酯的合成方法；b)在适合于从所述分子去除任何2’-氨基保护基团、环外氨基(碱基)保护基团和/或磷酸保护基团的条件下，将来自步骤(a)所述核酸分子与含水烷基胺、三烷基胺或烷基胺和三烷基胺接触，所述保护基团可以独立地存在或不存在。c)将具有来自步骤(b)的核酸分子的反应混合物与极性溶剂和三烷基胺·氢氟化物在适合于去除2’-OH保护基团的条件下接触；d)将具有所述核酸分子的来自步骤(c)的反应混合物加样到在合适的缓冲液中的选自下组的介质上：Pharmacia Source Q15、Biorad Macroprep 25Q、Pharmacia Q-sepharose、Perceptive POROS HQ、TOSOHAAS Q-5PW-HR、Q-5PW和超级Q-5PW介质，所述缓冲液包含选自下组的缓冲液：水、大约20mM磷酸钠和大约0.1M NaCl中的20％乙醇和大约20mM磷酸钠和大约0.1M NaCl中的乙腈；e)使用合适的洗脱缓冲液施加纯化梯度，分析级分并且使得纯级分能够汇集和脱盐。