[发明专利]稀土元素金属螯合标记定量蛋白质组的方法与试剂盒

摘要

本发明提供了一种稀土元素金属螯合标记蛋白质，用于定量蛋白质组学研究的新方法和试剂盒。该方法涉及蛋白质的还原烷基化和胰酶酶切、肽段的双功能试剂修饰、稀土元素金属的鳌合、多维液相色谱分离与多级串联质谱联用定量与鉴定。通过一级质谱峰离子信号强度来定量，蛋白质的鉴定通过串联二级质谱和数据库搜库。本发明还提供了便于该方法实施的试剂盒。

主权项

1.一种用于定量稀土元素金属螯合标记蛋白质的方法，该方法包括：(1)用还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；用烷基化试剂封闭巯基，防止其重新形成二硫键；(2)用化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，产生适于质谱分析的肽段；用试剂对酶切肽段的侧链氨基进行保护；(3)对肽段进行化学修饰和处理并进行质谱定量；其特征在于所述步骤(3)的处理方法为：(a)用一种或多种双功能螯合剂对肽段进行修饰，使其带上螯合基团；(b)分别用两种不同的或多种单同位素稀土元素金属盐离子，与标记在肽段上的螯合剂发生螯合作用；(c)将两种分别标记有不同稀土金属离子的待比较样本的肽段混合物合并，用色谱分离手段将合并肽段进行分离；(d)用质谱定量与鉴定肽段，进行质谱数据的解析及蛋白质的鉴定。