[发明专利]通过Cre－LoxP定点打靶体细胞克隆家畜作为乳腺生物反应器的研制无效
| 申请号： | 02145433.7 | 申请日： | 2002-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN1502694A | 公开（公告）日： | 2004-06-09 |
| 发明（设计）人： | 成国祥;陈建泉;吴国祥;汤家铭;赵建阳 | 申请（专利权）人： | 上海杰隆生物工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/12;C12N15/87;C12N5/10;A01K67/00;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 201203上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通过Cre－LoxP定点打靶体细胞克隆家畜来制备作为乳腺生物反应器的方法。它包括：(a)将含LoxP序列的构建物定点引入成纤维细胞；(b)筛选LoxP序列定点整合的细胞；(c)将含外源基因的打靶载体与Cre表达质粒/Cre蛋白，共转染LoxP序列定点整合的细胞，从而筛选得到定点整合外源基因的细胞；(d)再生成克隆动物。本发明还提供了相应的构建物和克隆细胞。本发明方法可高效地制备定点整合外源基因的乳腺生物反应器。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 cre loxp 定点 打靶 体细胞 克隆 家畜 作为 乳腺 生物反应器 研制 | ||
【主权项】：
1.一种定点打靶体细胞克隆家畜乳腺生物应器的制备方法，其特征在于，包括步骤：(a)通过基因打靶将一构建物定点引入家畜胎儿成纤维细胞，所述的构建物从5′→3′依次含有5′同源臂序列、LoxP序列、第一标记基因、和3′同源臂序列；(b)筛选得到LoxP序列定点整合的家畜胎儿成纤维细胞；(c)将打靶载体与Cre表达质粒/Cre蛋白，共转染LoxP序列定点整合的家畜胎儿成纤维细胞，所述的打靶载体从5′→3′依次含有LoxP序列、外源基因、第二标记基因、LoxP序列，并筛选得到定点整合有外源基因的成纤维细胞；(d)将步骤(c)的成纤维细胞的细胞核，移植入家畜去核卵母细胞，再生成克隆动物。
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