本发明公开了一种月桂烯合酶的变体,属于生物技术领域。所述月桂烯合酶变体基于SEQ ID NO.17所示的野生月桂烯合酶trCsMS序列,包括至少一个以下位点中的氨基酸突变:P22,R43,N102,N106,K140,L423,D471,N481,E523。所述月桂烯合酶变体的核苷酸分子的序列为SEQ ID NO.9~16中所示任意一组核苷酸序列。本发明提供的月桂烯合酶的变体相较野生型表现更好,能够提高微生物合成月桂烯的产量,具有良好的实际应用价值。
以长引物和PCR为基础的分子克隆技术具有操作简单、效率高、成本低的优点。随着高保真DNA聚合酶的出现,基于PCR的分子克隆方法越来越广泛地被使用。本发明涉及一种嵌合体构建和片段插入的分子克隆策略,首次命名为MP克隆(mega primer cloning)。该方法包括以下几步:1)长引物的PCR扩增。2)长引物参与的第二轮PCR扩增。3)PCR产物DpnI消化并转化到大肠杆菌感受态中。PCR产物的纯化可以显著的提高MP克隆的效率。实验证明,这种方法是一种简单有效的分子克隆工具。