本公开提供了一种用于检测猫冠状病毒抗体的间接ELISA试剂盒,所述试剂盒中含有包被抗原S重组蛋白;所述S重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开还提供了上述试剂盒在猫冠状病毒抗体检测中的应用。本发明人依据间接ELISA的原理,研制了猫冠状病毒抗体的ELISA检测试剂盒,首先,通过筛选抗原性强且保守的猫冠状病毒S2蛋白,扩增和克隆基因;然后构建原核表达载体,原核表达融合蛋白:接着通过Western blotting进行免疫原性分析,将该S重组蛋白进行纯化作为包被抗原,最终获得了灵敏度较高、特异性强、稳定性好的间接ELISA试剂盒。