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[发明专利]甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立-CN201410336366.6在审
发明人：钱春桃;毕研飞;陈劲枫;娄群峰;徐兵划;郭静 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-07-14 - 公布日： 2015-03-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立，属于生物技术育种领域，专用于甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-1与Gsb-4的聚合育种。通过同时添加引物CMCT505和CMTA170a，并调整DNTPs、Buffer与模板DNA的浓度及退火温度等，设计各影响因素的正交试验，通过对双亲后代F₁以及单一PCR体系扩增筛选到的聚合基因幼苗DNA进行鉴定，建立了可以同时扩增出189bp和121bp两个目的条带的双重SSR-PCR体系。该双重PCR体系具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，特别是节省珍贵的实验材料。对甜瓜乃至整个蔬菜作物的聚合育种实践和理论研究具有重要的借鉴意义。
甜瓜聚合基因 7198 双重 ssr pcr 体系建立

[发明专利]利用基因组原位杂交快速构建黄瓜中期染色体核型方法-CN201410257785.0无效
发明人：娄群峰;张云霞;张振涛;杨树琼;王筠竹;陈劲枫 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2014-06-09 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了利用黄瓜基因组原位杂交技术快速构建黄瓜中期染色体核型的方法，它是通过提取黄瓜基因组DNA，并将其标备探针。取黄瓜根尖进行酶解，火焰干燥法制片，获得分散度良好的中期染色体制片。将基因组DNA探针变性后杂交到变性的中期染色体制片上，利用高严谨度的杂交条件，使得染色体串联重复序列产生清晰可辨的荧光信号，从而构建黄瓜的中期染色体核型。本发明利用黄瓜基因组DNA作为探针，通过一次GISH快速构建黄瓜中期染色体核型，提高了试验效率。通过此方法，基于黄瓜基因组DNA探针在每条染色体上信号分布模式的不同，可快速构建出黄瓜中期染色体核型，为物种的核型分析研究提供了新的方法与参考。
利用基因组原位杂交快速构建黄瓜中期染色体核型方法

[发明专利]黄瓜花粉半薄切片MTG-DAPI双染色观察线粒体DNA-CN201310396467.8有效
发明人： 陈劲枫;赵娟;沈佳;娄群峰;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-09-04 - 公布日： 2014-06-11 - 主分类号： G01N1/36 文献下载
摘要：本发明是对黄瓜花粉的树脂半薄切片进行MTG(Mito Tracker Green)和DAPI双荧光染色观察的方法，涉及植物组织固定、植物花药Technovit7100树脂半薄切片以及MTG-DAPI双荧光染色，属于生物技术领域。本发明首次观察到黄瓜贴壁期花粉生殖细胞内的线粒体及其包含的DNA，可以用于探索黄瓜花粉发育过程中线粒体数目的变化规律，同时为进一步研究黄瓜线粒体父系遗传的相关机制做基础。该方法也可以应用于其他植物材料中线粒体的观察，用以确定植物材料是否具有线粒体基因组父系遗传或双亲遗传的潜力。
黄瓜花粉切片 mtg dapi 染色观察线粒体 dna

[发明专利]一种提高黄瓜远缘杂交组培苗驯化成活率的方法-CN201310409718.1无效
发明人： 陈劲枫;贾利;娄群峰;钱春桃;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-09-11 - 公布日： 2013-12-11 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及了一种提高黄瓜远缘杂交组培苗驯化成活率的方法，属于生物技术领域，主要用于黄瓜种属间杂交材料的扩繁保存和驯化成苗，为远缘杂交技术在黄瓜育种中的应用提供了一个技术保证。其步骤主要包括：胚拯救获取无菌苗、诱导分化不定芽、再生芽的伸长和生根培养、驯化移栽及在此过程中的特殊配制的培养基及外界环境条件的调控。本方法操作简便，对原材料及实验室设施要求较低，但成效极好，可使远缘杂交组培苗获得更强壮的功能根，且缩短了炼苗周期，提高了移栽成活率，不仅为黄瓜种属间杂交乃至甜瓜属内杂交提供了稳定高效的再生苗驯化体系，而且也可以用于甜瓜属珍惜野生种的保存和扩繁及普通黄瓜组培苗的移栽成苗。
一种提高黄瓜远缘杂交组培苗驯化成活率方法

[发明专利]甜瓜属种间渐渗系群体构建及其用于黄瓜育种的方法-CN201310326103.2无效
发明人： 陈劲枫;贾利;娄群峰;钱春桃;马华;孟佳丽 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-07-31 - 公布日： 2013-10-23 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明甜瓜属种间渐渗系群体构建及其用于黄瓜育种的方法，属于生物技术育种领域。通过野生酸黄瓜和黄瓜种间杂交-回交-自交，结合SSR分子标记辅助选择，成功构建了由86份株系组成的甜瓜属首个种间渐渗系群体。该渐渗系群体包含了覆盖黄瓜全基因组54％的野生酸黄瓜的导入片段，并且通过田间接种鉴定，筛选到抗病性较强的三份资源“IL2”、“IL24”、“IL49”，将其分别与优良栽培黄瓜杂交后又可获得一系列具有较强抗病能力的黄瓜新品系。黄瓜/酸黄瓜种间渐渗系群体不仅拓宽了黄瓜的遗传基础，而且为开发利用野生酸黄瓜的优良基因提供了新的种质资源，也为今后定位黄瓜的重要基因或遗传位点以及功能研究奠定了材料基础。
甜瓜属种间渐渗系群体构建及其用于黄瓜育种方法

[发明专利]黄瓜高分辨率染色体荧光原位杂交的方法-CN201310081001.9无效
发明人：娄群峰;何玉华;陈劲枫;程春燕;张云霞;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-03-14 - 公布日： 2013-05-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供了一种荧光原位杂交的方法，以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片，在80℃的70％去离子甲酰胺中变性，梯度酒精中脱水干燥；采用碱裂解法提取目标质粒DNA，利用缺刻平移法进行标记，配制杂交混合液，90℃变性后，加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交，最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术，可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制，由于其一次性可加入多个探针，避免了对一张制片多次重复杂交，大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA，用于封阻杂信号和重复序列信号，提高了靶信号的辨识率，增加了实验结果的准确性。
黄瓜高分辨率染色体荧光原位杂交方法

[发明专利]黄瓜粗线期染色体的制片方法-CN201310081002.3无效
发明人：娄群峰;何玉华;陈劲枫;贾利;李季 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2013-03-14 - 公布日： 2013-05-22 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种黄瓜减数分裂粗线期染色体制片的方法，它是取黄瓜盛花期植株上的花蕾，放入体积比为3∶1的E∶G(乙醇∶冰醋酸)固定液中固定，剥开花蕾，取处于减数分裂粗线期的花药用纤维素酶和果胶酶进行酶解，取酶解好的一个花药在适量E∶G固定液中捣碎，吸取悬浮液涂片，然后用火焰干燥法制片。本发明采用涂片后再火焰干燥的方法，不仅可以制得分散度高，形态好的粗线期染色体，而且提高了黄瓜花药的利用率；更重要的是，其所得的粗线期染色体制片可直接用于荧光原位杂交，为黄瓜的细胞学研究提供了可靠的保证。
黄瓜粗线期染色体制片方法

[发明专利]甜瓜抗蔓枯病聚合基因的鉴定-CN201210254561.5无效
发明人： 陈劲枫;徐兵划;钱春桃;娄群峰;王红英 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2012-07-23 - 公布日： 2013-01-02 - 主分类号： A01H1/04 文献下载
摘要：本发明的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合方法及其鉴定专用于甜瓜抗蔓枯病聚合抗源筛选以及抗蔓枯病标记辅助聚合育种研究。两个抗蔓枯病材料PI420145和PI482398杂交、后代连续自交得到抗蔓枯病基因稳定遗传的F4，F4聚合了PI420145和PI482398的抗蔓枯病基因，且聚合后抗源的聚合抗源的抗性增强，抗性高于亲本。PI420145和PI482398杂交及自交后代F4聚合双亲的蔓枯病抗性基因，该抗源的蔓枯病抗性基因与AFLP标记EcoRI-TG/MseI-CTC200，EcoRI-AT/MseI-CTG90，EcoRI-TC/MseI-CAG60连锁，同时SSR标记CMAT170a连锁。通过本发明提供的甜瓜蔓枯病抗性基因聚合及其鉴定方法，获得聚合基因材料，其抗性高于单一抗源，大大提高抗蔓枯病甜瓜的选择效率，在甜瓜抗蔓枯病育种中，该聚合抗源可做为供体亲本，能够加速甜瓜抗蔓枯病育种进程。
甜瓜抗蔓枯病聚合基因鉴定

[发明专利]抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法-CN201110123037.X无效
发明人： 陈劲枫;张燕霞;叶德友;钱春桃;娄群峰;程春燕 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2011-05-12 - 公布日： 2011-11-30 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明属于生物技术育种领域，涉及抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法。本发明通过野生种与栽培种的种间杂交，染色体加倍获得双二倍体新种，经回交、自交获得种间渐渗系，再对黄瓜渐渗系利用人工苗期卵液接种法进行鉴定，鉴定结果发现渐渗系10299F-5的病情指数均为2.0，表现为抗病，由此得到抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料。该抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料农艺性状优良，可直接作为育种材料，不仅填补了黄瓜抗南方根结线虫资源的空白，还为其它植物的接种鉴定提供参考，而且为今后黄瓜品种的改良、抗病基因转移、基因定位、分子标记、基因克隆等提供了有用的遗传材料。
南方线虫黄瓜渐渗系材料培育方法

[发明专利]甜瓜属异源三倍体黄瓜的选育方法-CN201110107687.5无效
发明人： 陈劲枫;张淑霞;陈龙正;娄群峰;钱春桃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2011-04-28 - 公布日： 2011-10-12 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明甜瓜属异源三倍体黄瓜的选育方法，属于生物技术育种领域，专用于黄瓜的染色体工程及倍性育种。将甜瓜属双二倍体新种与二倍体黄瓜进行正反杂交，杂交果实中收获的种子即为异源三倍体黄瓜种子。实生异源三倍体黄瓜生长势强，经济性状优良，可作为一种耐低温、弱光，抗南方根结线虫的加工型温室栽培黄瓜新品种进行推广应用。实生异源三倍体黄瓜还为研究黄瓜子叶遗传发育规律、果实发育、单性结实机理及杂种优势机理等科学问题提供了宝贵的材料，同时方便了异源三倍体黄瓜的利用，有利于野生优异基因的转导，培育黄瓜新品种。
甜瓜属异源三倍黄瓜选育方法

[发明专利]甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记-CN201110081073.4无效
发明人： 陈劲枫;王红英;钱春桃;郭勤卫;薄凯亮 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2011-03-31 - 公布日： 2011-09-28 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明属于作物遗传育种与生物技术领域，涉及甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记。甜瓜资源PI482398抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记，用SSR标记引物CMAT170a扩增含甜瓜资源PI482398抗蔓枯病基因Gsb-4的育种材料或品种DNA，获得的120bp扩增片段即为甜瓜资源PI482398抗蔓枯病基因Gsb-4的SSR标记，该SSR标记与抗性基因的遗传距离为5.14cM。本发明在国际上首次获得1个与甜瓜抗蔓枯病因Gsb-4紧密连锁的SSR分子标记。通过检测该分子标记，可以预测甜瓜植株的蔓枯病抗性，进而快速筛选抗病品种或品系用于甜瓜育种。抗病基因位点检测方便快速，不受环境条件限制。
甜瓜抗蔓枯病基因 gsb ssr 标记

[发明专利]全雌加工型黄瓜优加全雌09的培育及应用-CN201010017675.9无效
发明人： 陈劲枫;张淑霞;娄群峰;钱春桃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2010-01-12 - 公布日： 2010-10-20 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及全雌加工型黄瓜优加全雌09的培育及其应用，属于生物技术育种领域。将全雌型美国切片型黄瓜410与雌雄同株型加工型黄瓜HH1-8-1-2杂交，所得F1与HH1-8-1-2回交，在回交后代中选择全雌单株与雌雄同株型黄瓜亲本HH1-8-1-2连续回交4代，选择BC4F1的全雌单株自交，在BC4F2中选择全雌单株继续自交，最后选择BC4F3均为全雌型植株的株系，把该株系黄瓜混合授粉，获得生长势强、优质高产的全雌加工型黄瓜新品种优加全雌09。将优加全雌09与普通栽培黄瓜杂交可获得种子纯度高且具有较强杂种优势的全雌型黄瓜品种。
加工黄瓜优加全雌 09 培育应用

[发明专利]全雌华南型黄瓜华南全雌09的培育及应用-CN201010017676.3无效
发明人： 陈劲枫;张淑霞;娄群峰;钱春桃;贾利 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2010-01-12 - 公布日： 2010-09-08 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及全雌华南型黄瓜华南全雌09的培育及其应用，属于生物技术育种领域。将全雌型欧洲温室型黄瓜EC1与雌雄同株型华南型黄瓜平望小黄瓜杂交，所得F1与平望小黄瓜回交，在回交后代中选择全雌单株与雌雄同株型黄瓜亲本平望小黄瓜连续回交3代，选择BC3F1的全雌单株自交，在BC3F2中选择全雌单株继续自交，最后选择BC3F3均为全雌型植株的株系，把该株系黄瓜混合授粉，获得生长势强、优质高产的全雌华南型黄瓜新品种华南全雌09。将华南全雌09与普通栽培黄瓜杂交可获得种子纯度高且具有较强杂种优势的全雌型黄瓜品种。
华南黄瓜 09 培育应用

[发明专利]全雌华北型黄瓜华北全雌2号的培育及应用-CN201010017672.5无效
发明人： 陈劲枫;娄群峰;张淑霞;钱春桃;贾利 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2010-01-12 - 公布日： 2010-07-28 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及全雌华北型黄瓜华北全雌2号的培育及其应用，属于生物技术育种领域。将全雌型欧洲温室型黄瓜EC1与雌雄同株型华北型黄瓜P02杂交，所得F1与P02回交，在回交后代中选择全雌单株与雌雄同株型黄瓜亲本P02连续回交4代，选择BC4F1的全雌单株自交，在BC4F2中选择全雌单株继续自交，最后选择BC4F3均为全雌型植株的株系，把该株系黄瓜混合授粉，获得生长势强、优质高产的全雌华北型黄瓜新品种华北全雌2号。将华北全雌2号与普通栽培黄瓜杂交可获得种子纯度高且具有较强杂种优势的全雌型黄瓜品种。
华北黄瓜培育应用

[发明专利]全雌华北型黄瓜华北全雌3号的培育及应用-CN201010017673.X无效
发明人： 陈劲枫;张淑霞;娄群峰;贾利;钱春桃 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2010-01-12 - 公布日： 2010-07-14 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明涉及全雌华北型黄瓜华北全雌3号的培育及其应用，属于生物技术育种领域。将雌雄同株型华北型黄瓜CC3与全雌型欧洲温室型黄瓜EC1杂交，所得F1与CC3回交，在回交后代中选择全雌单株与雌雄同株型黄瓜亲本CC3连续回交7代，选择BC7F1的全雌单株自交，在BC7F2中选择全雌单株继续自交，最后选择BC7F3均为全雌型植株的株系，把该株系黄瓜混合授粉，获得生长势强、优质高产的全雌华北型黄瓜新品种华北全雌3号。将华北全雌3号与普通栽培黄瓜杂交可获得种子纯度高且具有较强杂种优势的全雌型黄瓜品种。
华北黄瓜培育应用