本发明涉及一种重组毕赤酵母菌的构建方法,包括如下步骤:(1)将L‑天冬氨酸β‑脱羧酶基因aspD与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K‑aspD,然后转化到大肠杆菌DH5α中,获得重组菌株DH5α/pPIC9K‑aspD;所述L‑天冬氨酸β‑脱羧酶氨基酸序列如序列表中的SEQ ID No.1所示,基因序列如SEQ ID No.2所示;(2)将重组质粒pPIC9K‑aspD在毕赤酵母GS115中成功表达,得到高产稳定性重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K‑aspD。利用毕赤酵母菌制备得到的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶的酶活高且稳定,用于生产L‑丙氨酸,具有发酵时间短,转化速度快,生产效率高,副产物少,成本低等优点。
本发明涉及一种重组枯草芽孢杆菌的构建方法,包括如下步骤:(1)将L‑天冬氨酸β‑脱羧酶基因aspD与枯草芽孢杆菌表达质粒连接,构建重组质粒;所述L‑天冬氨酸β‑脱羧酶氨基酸序列如序列表中的SEQ ID No.1所示,基因序列如SEQ ID No.2所示;(2)重组质粒转化入枯草芽孢杆菌中,得到重组枯草芽孢杆菌。利用该重组枯草芽孢杆菌发酵得到的L‑天冬氨酸β‑脱羧酶含酶液,酶活高且稳定,用于生产L‑丙氨酸,具有转化时间短,转化速度快,生产效率高,副产物少,成本低等优点,适用于工业化生产。
本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶、其编码基因及其应用,其中β‑半乳糖苷酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,或者与所述SEQ ID NO:1序列有92%以上的相似性或同源性的氨基酸序列;编码所述β‑半乳糖苷酶的基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明β‑半乳糖苷酶具有有机溶剂耐受性,能够在有机溶剂中高效催化合成低聚半乳糖,低聚半乳糖的最高产物转化效率达到55.8±0.8%,是无有机溶剂时的1.7倍。