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[发明专利]重组的长效人生长激素融合蛋白及其制备和用途-CN201710305492.9在审
发明人：许必雄;郭颀然 -专利权人：上海兴迪金生物技术有限公司
申请日： 2017-05-03 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了重组的长效人生长激素融合蛋白及其制备和用途。具体地，本发明提供一种融合蛋白，所述的融合蛋白具有式I所示的结构：式中，X为生长激素元件；Y1和Y2各自独立为Fc元件；L为无或连接肽；“‑”为共价键(如肽键)；“…”表示n个位于Y1和Y2之间的链间二硫键，其中n为1、2、3、4、5或6，
融合蛋白人生长激素制备生长激素链间二硫键共价键连接肽式中肽键

[发明专利]一种凝血八因子融合蛋白及其制备方法和用途-CN201410531795.9有效
发明人：许必雄;郭颀然;陈汉胜 -专利权人：上海兴迪金生物技术有限公司
申请日： 2014-10-11 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供了一种凝血八因子融合蛋白及其制备方法和用途。本发明的融合蛋白所述融合蛋白从N端到C端依次含有B区缺失的凝血八因子、连接肽和人IgGFc变体。在本发明中，在B区缺失的凝血八因子和人IgGFc变体之间添加特殊设计的连接肽，可以使Fc区域远离B区缺失的凝血八因子分子的酶活性中心，从而提高融合蛋白的体外生物活性，且人的IgG Fc变体在CH2区域的228、235、445位点含有氨基酸突变，从而降低抗体Fc片段的ADCC效应功能。与现有的同类产品比较，具有类似或更高的体外生物活性、更低的vWF蛋白的结合力、更长的半衰期、更长的给药间隔以及更低的用药剂量。
一种凝血因子融合蛋白及其制备方法用途

[发明专利]一种重组人GLP-1-Fc融合蛋白-CN201410531803.X有效
发明人：许必雄;郭颀然;冯金梦 -专利权人：上海兴迪金生物技术有限公司
申请日： 2014-10-11 - 公布日： 2018-06-08 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白及其制备方法和用途。本发明提供一种重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白，所述重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白包括两个结构功能区域，分别为重组GLP‑1片段和人免疫球蛋白的Fc片段，所述重组GLP‑1片段的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明所提供的重组人GLP‑1‑Fc融合蛋白，与原形GLP‑1分子同源性达到97%，且依然保持了优良的生物学活性和动物学活性。
人免疫球蛋白生物技术领域氨基酸序列生物学活性结构功能同源性制备

[发明专利]GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法-CN201410531801.0有效
发明人：许必雄;郭颀然;赵红阳 -专利权人：上海兴迪金生物技术有限公司
申请日： 2014-10-11 - 公布日： 2018-03-23 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法。本发明提供一种GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，包括如下步骤将GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白编码序列克隆至表达载体中；将表达载体转染CHO‑DXB11细胞，培养并筛选出阳性细胞株；将所得细胞表达、纯化后，即得所述融合蛋白。本发明所提供的制备方法在CHO细胞系DXB11中表达GLP‑1‑Fc分子，不会产生降解问题，后续的纯化得率大大提高，生物学活性并未减弱，非常适合工艺业化生产需求。
glp 类似物抗体 fc 片段融合蛋白制备方法

[发明专利]NGF-Fc融合蛋白及其制备方法-CN201410334618.1在审
发明人：冯美卿;叶丽;鞠佃文;许必雄;郭颀然 -专利权人：复旦大学
申请日： 2014-07-14 - 公布日： 2016-01-27 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及一种NGF-Fc融合蛋白及其制备方法，本发明通过基因工程手段构建人免疫球蛋白IgG Fc与神经生长因子(NGF)融合基因的表达载体，转染哺乳动物细胞高表达生产NGF-Fc融合蛋白，然后纯化、鉴定和生物学活性检测。本发明通过构建的表达载体转染哺乳动物细胞可以表达出有生物活性的NGF-Fc融合蛋白，能获得150mg/L乃至更高的表达量，且获得的蛋白稳定性好、半衰期长,可用于制备治疗阿尔兹海默症、糖尿病性周围神经病变、帕金森氏病、面部神经炎、颅脑，脊髓外伤、急性脑血管病，脑萎缩等神经损伤等神经系统疾病，以及化学品毒品所致的周围神经损伤急性脑血管性中枢神经损伤的药物。
ngf fc 融合蛋白及其制备方法

[发明专利]一种从细胞培养液中分离纯化重组人凝血八因子的方法-CN201210241870.9有效
发明人： 郭颀然;杨松峰;许必雄 -专利权人：上海泰龙生物医药科技有限公司
申请日： 2012-07-12 - 公布日： 2014-01-29 - 主分类号： C07K14/755 文献下载
摘要：本发明公开了一种从细胞培养液中分离纯化重组人凝血八因子的方法，包括下列步骤：去除重组人凝血八因子细胞培养液中的细胞；将去除细胞的培养液超滤浓缩；将超滤浓缩的培养液经阴离子交换层析、免疫亲和层析或凝胶过滤层析中的一项或多项纯化获得纯化的重组人凝血八因子；所述阴离子交换层析、免疫亲和层析及凝胶过滤层析中所采用的平衡缓冲液及洗脱缓冲液中，均含有摩尔浓度为1-100mM的钙离子及摩尔浓度为1-100mM的锌离子。本发明通过在整个层析过程所用的缓冲液中添加钙锌离子的方法，有效解决了八因子的降解问题，使得整个纯化操作能够在常温下进行，大大提高了工作效率，并且还提高了终产品的比活。
一种细胞培养液分离纯化重组凝血因子方法

[发明专利]一种重组人胰岛素原转肽方法及其在重组人胰岛素下游纯化中的应用-CN201110186944.9有效
发明人： 郭颀然;许必雄 -专利权人：上海泰龙生物医药科技有限公司
申请日： 2011-07-05 - 公布日： 2013-01-09 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人胰岛素原转肽方法及其在重组人胰岛素下游纯化中的应用，本发明的重组人胰岛素原转肽方法为将纯化的重组人胰岛素原经转肽反应生成重组人胰岛素，其中，转肽反应的反应体系包括：重组人胰岛素原10-30g/L、二甲基亚砜（DMSO）100-200ml/L、叔丁醚苏氨酸叔丁酯63-103g/L、1,4-丁二醇600-800ml/L、胰蛋白酶2-6g/L、Ca2+0.2-100mmol/l、Mg2+0.2-100mmol/l和水,pH为6.5-7.0；转肽反应的反应条件为：温度27-47℃，搅拌反应2-10小时。本发明的重组人胰岛素原转肽方法可用于重组人胰岛素的下游纯化。本发明的转肽方法不仅缩短了转肽反应的时间、提高了生产效率，还能减少副产物的产生。
一种重组胰岛素原转肽方法及其下游纯化中的应用

[发明专利]从细胞培养液或血浆组分中分离纯化高纯度活化凝血七因子的方法-CN201110031838.3无效
发明人：许必雄;郭颀然 -专利权人：上海兴迪金生物技术有限公司
申请日： 2011-01-28 - 公布日： 2011-08-24 - 主分类号： C07K14/745 文献下载
摘要：本发明公开了一种从细胞培养液或血浆组分中分离纯化高纯度活化凝血七因子的方法，依次包含以下步骤：先原料经亲和层析纯化并收集含有凝血七因子的洗脱液，而后加入凝血酶及镁离子活化凝血七因子，最后对活化产物浓缩并进行病毒灭活获得最终产物。本发明通过亲和层析的方法可以一步纯化凝血七因子，凝血酶活化过程简单高效，可从细胞培养液或血浆组分中分离纯化七因子，大大提高了血浆的综合利用率，并可提供更安全高效的高纯度七因子蛋白药物。
细胞培养液血浆组分分离纯化纯度活化凝血因子方法

[发明专利]一种从血浆组分四沉淀中制备高纯ApoA-I的生产工艺-CN201010022840.X有效
发明人：黄凯;何秋;许必雄;李春洲;李军辉;沈积慧;郭颀然 -专利权人：上海莱士血液制品股份有限公司
申请日： 2010-01-15 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C07K14/775 文献下载
摘要：本发明公开了一种从血浆组分四中纯化得到高纯ApoA-I的方法，包括下列步骤：血浆组分四沉淀溶解，离心除去硅藻土及杂质，收集上清液；上清液加入氯化钠使ApoA-I蛋白凝聚析出，离心获得ApoA-I沉淀；复溶ApoA-I沉淀并过滤；滤液先后经阴离子柱层析及疏水柱层析，分离获得高纯的ApoA-I溶液。本发明的方法工艺制备的ApoA-I具有很高的纯度，纯度可达95％以上，ApoA-I得率可达70％，且操作安全方便，容易实现工艺放大，非常适合工业化生产。
一种血浆组分沉淀制备高纯 apoa 生产工艺

[发明专利]热渗透休克初步纯化重组人甲状旁腺激素融合蛋白的方法-CN200510025519.6无效
发明人：童望宇;魏东芝;郭颀然 -专利权人：华东理工大学
申请日： 2005-04-28 - 公布日： 2005-11-23 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种渗透休克与热处理相结合简称热渗透休克初步纯化重组人甲状旁腺激素(PTH)融合蛋白以代替金属鏊合层析的方法。它的操作步骤如下，发酵液预处理：发酵液经离心后除去上清液得到菌体，菌体悬浮于高渗缓冲溶液中，充分搅拌后静置，PTH在菌体胞内；热渗透休克技术：将含有PTH的高渗溶液搅拌后离心的菌体混悬于低渗缓冲溶液中加热，处理后离心收集上清液，即可。本发明具有过程集成、工艺简单、生产周期短、操作方便、成本低等优点。
渗透休克初步纯化重组甲状旁腺激素融合蛋白方法

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