本发明涉及一株同时表达F4和F18菌毛的猪源大肠杆菌无毒分离株及其应用,所述猪源大肠杆菌无毒分离株F418的保藏编号为CCTCC M 2022089,保藏日期为2022年1月18日。本发明分离菌株为大肠杆菌,能同时表达F4和F18两种菌毛抗原,为猪源自然分离株,PCR测试表明该菌株缺乏LT和STb肠毒素基因,不产生肠毒素,能够良好地黏附定植于宿主猪,该菌株具有开发成细菌无毒活疫苗候选株的潜力,通过口服该毒株能够良好地黏附定植于宿主猪,诱导仔猪产生抗F4和F18两种菌毛抗原的免疫应答,发挥一定免疫效力,安全性具有保障,有望成为防控F4和F18大肠杆菌感染的潜在活疫苗候选株。