本发明公开一种副猪嗜血杆菌CDT三顺反子及重组CDT的制备方法。本发明首先公开了一种副猪嗜血杆菌CDT三顺反子,具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明进一步公开了副猪嗜血杆菌重组CDT的制备方法。本发明建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT的制备方法,利用副猪嗜血杆菌三个亚基之间天然的基因间隔区序列,构建不含信号肽编码序列的CDT三顺反子,克隆到载体中构建不含信号肽编码序列的三顺反子重组质粒,实现了三个亚基在同一重组大肠杆菌菌株中的同步表达及同步纯化,简化了重组CDT的制备过程,所制备的重组CDT具有良好的生物学活性,为下一步精确研究副猪嗜血杆菌CDT生物学功能奠定了基础。