本发明公开了一种孝顺竹来源的蛋白连接酶原或酶及其应用。所述蛋白连接酶酶原氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,其突变体与SEQ ID NO:1相比具有G217V差异。本发明还公开了蛋白连接酶原激活后相应的蛋白连接酶或其突变体,编码酶原或酶的多核苷酸、包含其的重组表达载体和转化体,以及包含它们的试剂盒。本发明还公开了蛋白连接酶或蛋白连接酶突变体的制备方法、AEP型蛋白连接酶的辅助激活的方法以及利用蛋白连接酶连接或环化多肽或蛋白的方法。本发明从孝顺竹中鉴定出一个新的AEP型蛋白连接酶,其突变体具有相当高的蛋白连接酶活力,且水解酶活力显著降低,能有效催化蛋白质分子间连接和多肽分子内环化,有望作为一个新的工具酶。