本发明提供一种用于鉴别不同冬青品种的引物组合及鉴别方法。所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12和SEQ ID NO.13‑14所示。本发明提供一组基于所述引物的PCR检测方法,该方法以‘Wirt L.Winn’、代茶冬青、大别山冬青、中型冬青、钝齿冬青和狭冠冬青的DNA为模板,利用不同的退火温度进行扩增,并根据扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果鉴别不同冬青品种。本发明引物特异性好,准确的高,可为冬青的实际生产和销售带来便利,同时该操作方法简单,且成本低廉。
本申请涉及生物技术领域,尤其涉及一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用方法。‘高挑’、‘贝绿’、普通冬青、‘爱美丽’、‘Wirt L.Winn’和代茶冬青是市场上常见6个冬青品种,其观赏性高、适应性强、推广面积大。然而这6个品种的扦插幼苗较难通过形态学的方式进行区分。本发明通过提供七组引物对,SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12和SEQ ID NO.13‑14,及其配套的扩增程序,可以有效区分鉴定这6个冬青品种,为实际生产和销售带来便利,同时该操作方法简单,且成本低廉。
本发明公开了一种大别山冬青IdChlH基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用,属于植物基因工程技术领域。本发明所述大别山冬青IdChlH基因具有如SEQ ID NO.1所示的序列,沉默体系具有如SEQ ID NO.2所示的沉默片段基因序列。通过构建含有IdChlH基因特异性片段的pTRV2病毒沉默表达载体,利用农杆菌介导法侵染大别山冬青叶片,诱导大别山冬青内源IdChlH基因发生沉默,有效降低了大别山冬青IdChlH基因的表达水平,从而使叶片出现黄色表型。本发明首次构建了大别山冬青的VIGS技术体系,该VIGS技术体系简便、快速和高效,为大别山冬青上的大规模基因功能研究提供了有力的工具。
本发明公开了一种荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的引物对及方法。PGK基因作为内参基因在荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数中的应用。一种应用于荧光定量PCR鉴定菊花内、外源基因拷贝数的内源基因扩增引物对,正向引物序列如SEQ ID NO.1所示,反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。本发明可以快速、准确、高效的鉴定菊花内源基因拷贝数和转基因菊花转内源、转外源基因拷贝数。通过本发明提供的检测引物和方法,以菊花和转基因菊花为实验材料,根据待检测拷贝数的基因和内源参照基因PGK的CT值比较分析,即可得出菊花内源基因拷贝数和转基因菊花所转基因拷贝数。该检测方法为复杂基因组基因的拷贝数鉴定提供了新思路,大大提高了检测基因拷贝数的效率。