本发明涉及一种可羟基化黄体酮C11α位的P450酶及其基因、表达载体、细胞及应用,属于酶工程技术和基因工程技术领域。来源于原核微生物巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)H‑1的黄体酮P450羟化酶CYP BMH3及其基因序列cyp bmh3,该基因全长1233bp,编码410个氨基酸,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,基因序列如SEQ ID NO.2所示;并基于该酶的异源表达实现了黄体酮的高效转化,同时专一性高,减少反应副产物,降低了生产成本,为其进一步的工业化应用奠定基础。