本发明公开的是一种高效表达GDH的工程菌株及其制备方法和应用,高效表达GDH的工程菌,含有SEQ ID NO1所述序列的质粒,利用大肠杆菌rosetta(DE3)作为宿主菌,工程菌株构建方法:将GDH原始基因构建到PET‑14b质粒中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),产生出高效表达GDH的工程菌,重组GDH蛋白的纯化方法:诱导表达工程菌,菌液离心集菌后,超声破碎,收集破碎后上清;上清利用镍柱亲和层析;超滤脱盐,冻干保存,本发明通过将GDH原始基因构建到PET‑14b中并转化大肠杆菌Rosetta,能够高效表达GDH,酵液酶活高,发酵时间短、效率高,降低了生产成本,适合工业化生产。